【总结】细胞培养常见污染识别及处理_细胞技术讨论圈_商圈

【总结】细胞培养常见污染识别及处理

楼主收藏举报帖子创建时间: 2015-06-20 15:58 回复：37 关注量：201

细胞培养的质量好坏是细胞相关实验的基石，许多朋友都曾经历过因为细胞污染影响实验进度的郁闷，被老板批评是小事（反正既不是第一次，也不会是最后一次，咱心态要好，哈哈），要是影响到正常毕业就是大事了。
细胞技术版的许多求助帖子都涉及到细胞污染的识别（是不是细胞污染？是哪种细胞污染？）以及如何处理。对这些问题，刚接触细胞的朋友可能有时拿不准情况，也迫切的希望得到帮助，各位资深战友工作繁忙、又无法逐一应助。
怎么解决呢？
希望在这个帖子里，各位朋友可以分享自己经历过的细胞污染图片、分析或者检测过程（如果用了专门的试剂盒就更有说服力了，请具体说明）、处理经过、处理后的细胞图片、心得体会。在为后来人提供经验的同时，大家也可以互相探讨、共同提高。
参考格式：
1.内容（含图片）来源：原创、非原创（请说明具体来源）
2.细胞基本信息：名称、种属来源、冻存液、传代数、传代方法、培养基等。
3.图片：如污染前图片、处理后图片
4.污染识别（含试剂盒检测）、污染处理的过程。
5.心得体会。也欢迎各位战友积极讨论、发表自己独到的见解。
借用一句话：人人为我，我为人人！欢迎大家积极发言。

版主yj1984ren留言:
鼓励

wheatworm 2015-10-01 09:21
#1

小黑点：不随细胞生长而繁殖，可能是磷酸钙沉淀，反之，可能是黑焦虫，镜下会动，会影响细胞生长或重组细胞蛋白表达。
贴壁的黑色碎片可能是细胞裂解碎片。
霉菌污染：贴壁培养有丝状白色，严重的的霉斑，絮状，如果在发酵罐，白色的小球，像碾碎的泡沫塑料。
大肠细胞絮状结团漂浮，培养液浑浊
链球菌：圆形，亮点，三三两两连接
版主yj1984ren留言:
鼓励新战友
我不是蒋天 2015-08-23 13:43
#2

细胞中如果污染细菌，最常见的有革兰阳性菌，如枯草杆菌。以及大肠杆菌、假单孢菌等革兰阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会很快出现培养液变混浊，pH改变。

枯草杆菌镜下所见（图片来自网络）

大肠杆菌镜下所见（图片来自网络）

白色葡萄球菌镜下所见（图片来自网络）
也有少数培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。

祝大家实验都能顺利……
watericemoon88 2016-05-05 16:01
#3

常见的污染：
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理
2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
热爱医学的小猪 2015-06-20 17:41
#4

细胞污染是所有养细胞同学都过的第一关！楼主的帖子可以让站友少走不少弯路，为您点赞！
后岭人 2015-06-20 23:56
#5

细胞培养常见污染识别及处理
版主yj1984ren留言:
灌水？警告！
yj1984ren 2015-06-21 17:04
#6

前排支持！
欢迎各位回帖，内容有意义者，加分从优哟！
Young_SMMU 2015-07-01 19:40
#7

红色圆圈是可疑污染物，绿色方框是我培养的贴壁的细胞
各位大神帮忙鉴定一下呗
热爱医学的小猪 2015-07-01 23:56
#8

colonel100
红色圆圈是可疑污染物，绿色方框是我培养的贴壁的细胞
各位大神帮忙鉴定一下呗

红圈内是污染物？既有贴壁细胞又有污染物？刚刚传代24小时吗？贴壁的细胞也太少点了吧！这是原代吗？能不能有详细些的信息？
版主科研无止尽留言:
我目前只能投票，欢迎！
Young_SMMU 2015-07-02 09:46
#9

热爱医学的小猪
红圈内是污染物？既有贴壁细胞又有污染物？刚刚传代24小时吗？贴壁的细胞也太少点了吧！这是原代吗？能不能有详细些的信息？

原代，骨髓来源的MSC，人，分离接种72小时，是有点稀
热爱医学的小猪 2015-07-02 13:35
#10

colonel100
原代，骨髓来源的MSC，人，分离接种72小时，是有点稀
人来源啊只做过小鼠的BMDC，我觉得可以按照protocol去做，是不是污染，随着培养的继续自然就知道了。这些细胞要通过流式来分选出来吗？通过楼主的照片学习了！

wheatworm 帖子创建时间: 2015-10-01 09:21

小黑点：不随细胞生长而繁殖，可能是磷酸钙沉淀，反之，可能是黑焦虫，镜下会动，会影响细胞生长或重组细胞蛋白表达。
贴壁的黑色碎片可能是细胞裂解碎片。
霉菌污染：贴壁培养有丝状白色，严重的的霉斑，絮状，如果在发酵罐，白色的小球，像碾碎的泡沫塑料。
大肠细胞絮状结团漂浮，培养液浑浊
链球菌：圆形，亮点，三三两两连接

版主yj1984ren留言:
鼓励新战友

我不是蒋天帖子创建时间: 2015-08-23 13:43

细胞中如果污染细菌，最常见的有革兰阳性菌，如枯草杆菌。以及大肠杆菌、假单孢菌等革兰阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会很快出现培养液变混浊，pH改变。

枯草杆菌镜下所见（图片来自网络）

大肠杆菌镜下所见（图片来自网络）

白色葡萄球菌镜下所见（图片来自网络）
也有少数培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。

祝大家实验都能顺利……

常见的污染：
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理

2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。