qPCR结果比蛋白表达低,该如何解释
本人在做肺纤维化相关的课题,目前碰到一个问题请教各位
博来霉素造模大鼠肺纤维化,取肺组织做相关指标的qPCR,肺泡灌洗液做ELISA,比较空白组与造模组的表达量
现在得到的结果是qPCR与ELISA结果完全相反,例如TGF-β1,是公认的肺纤维化指标,在肺纤维化中应该是上调的。我做出的结果是ELISA在造模组明显上调,而qPCR却是下调,其他该上调的指标同样;而该下调的指标则是ELISA上调,qPCR下调。以TGF-β1重复了好几次qPCR,都是这样的结果。所以总的结果就是如题目所说(qPCR的溶解曲线单峰,扩增曲线也正常,有一点问题就是内参的CT值不是很稳定,18-22左右,内参选取的是GAPDH,不知道这个影响大不大)
现在一直停留在这个阶段不知该怎么办,烦请各位有空帮忙解答一下,非常感谢!
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水果湖医专肆业 2017-10-23 22:44#2
内参的cq值太高了吧 15.16差不多。
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恩_小仔 2017-10-27 22:57#3
水果湖医专肆业
内参的cq值太高了吧 15.16差不多。
内参ct值高可能什么原因呢?重复了几次都差不多这个水平 -
恩_小仔 2017-10-27 23:01#4
有没有在这方面有经验的站友可以推荐一下,急需解决这问题,拜托了
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水果湖医专肆业 2017-10-28 13:18#5
反正gapdh在我们身边的cq值都是20一下的。所以rna质量更重要。然后是rna和蛋白本来就是不同步的。
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采集阳光 2018-03-15 16:53#6
我的目的基因CP值在20-24之间,内参的在15-16左右,这样到底能不能计算,谢谢各位大侠
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