请教WB

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2018-03-07 12:03 回复:13 关注量:307

请问大神,这个条带怎么回事儿?

  • foreverpang 2018-03-07 12:38
    #1

    抗体不特异或者是本来就有两条带,看位置是否正确

  • Fuyuanbio 2018-03-07 14:46
    #2

    条带多是抗体的问题,不一定是错的,但一定是这个的原因。你的图不好看,是操作问题,不均匀。

  • chao_yw 2018-03-08 14:19
    #3

    楼上正解,推荐一篇wb操作方面的综述吧:

    https://www.labome.com/method/Western-Blot-Protocol-Troubleshootings-and-Survey-Results-on-Instruments-and-Reagents.html

  • 竹子flower 2018-03-08 15:13
    #4

    有可能抗体是多克隆抗体,目标蛋白存在亚型,如果分子量是对的,那应该没问题。背景颜色太深封闭的时间应该长一些

  • mi_cun 2018-03-09 16:50
    #5

    封闭时间太短,背景太深了

  • liujing860131 2018-03-09 22:53
    #6

    mi_cun

    封闭时间太短,背景太深了

    背景深是什么原因?用软件调整也调整不好

  • rankaikai319 2018-03-12 10:47
    #7

    看着楼主的问题,觉得WB背景很深,一个是抗体封面的问题,可能封闭时间过长洗膜不充分,导致非特异性蛋白的结合。另外,抗体特异性不是很好,条带多,不清楚主带。希望对你有帮助

    楼主可把Marker标注清楚,自己的分子量以及实验的条件写明,大家好帮你找问题

  • 宸之遥 2018-03-15 21:44
    #8

    foreverpang

    抗体不特异或者是本来就有两条带,看位置是否正确

    估计抗体特异性不好,用的Bioworld的抗体,用鼠的细胞还可以,这图是人的细胞,估计特异性不好吧

  • 宸之遥 2018-03-15 21:46
    #9

    rankaikai319

    看着楼主的问题,觉得WB背景很深,一个是抗体封面的问题,可能封闭时间过长洗膜不充分,导致非特异性蛋白的结合。另外,抗体特异性不是很好,条带多,不清楚主带。希望对你有帮助

    楼主可把Marker标注清楚,自己的分子量以及实验的条件写明,大家好帮你找问题

    封闭了2个小时,是不是封闭时间太长了曝光的时候比较难曝,也会导致背景比较深?这个条带都是目标蛋白,没有MARKER

  • 宸之遥 2018-03-15 21:46
    #10

    mi_cun

    封闭时间太短,背景太深了

    封闭了2个小时...