食用菌母种培养基的配制具体步骤
母种培养基的配制:
1.器具:试管 刀 天平 铝锅 棉塞 纱布 漏斗 烧杯 量筒
2.常用的母种培养基配方
①马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯(去皮)200g,葡萄糖20g。琼脂20g,水1000ml,{如果需要配制250ml的培养基,那么马铃薯、葡萄糖、琼脂的比例是50:5:5},也可用蔗糖取代葡萄糖,即为PSA培养基。还可以添加磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,维生素B1 10㎎,即为马铃薯综合培养基。广泛适用于各种食用菌母种的分离,培养和保藏。
②马铃薯玉米粉培养基:马铃薯(去皮)200g,蔗糖20g,玉米粉50g,琼脂20g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g,水1000ml。本配方适合于香菇、黑木耳、猴头菌的培养。
③马铃薯黄豆粉培养基:马铃薯200g,蔗糖20g,琼脂20g,黄豆粉20g,碳酸钙10g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g,水1000ml。适用于蘑菇、草菇。
④葡萄糖蛋白胨琼脂培养基:葡萄糖20g,蛋白胨20g,琼脂20g,水1000ml。
⑤蛋白胨、酵母、葡萄糖琼脂培养基:蛋白胨2g,酵母膏2g,硫酸镁0.5g,磷酸二氢钾0.5g,磷酸氢二钾1g,葡萄糖20g,维生素B1 20㎎,琼脂20g,水1000ml。
具体步骤:
1.计算。
按照选定的培养基配方,计算各种成分的用量。
2.称量。
用天平秤取各种物质,马铃薯去皮去芽眼,削掉青绿部分,对不易称量的成分,可用玻棒和烧杯称重,微量元素等需要量少,难以称准时,可先配成较浓的原液,再从中取出需要的量。
3.配制。
若配制合成培养基,先量取蒸馏水,加入琼脂,加热溶化;再加入称好的其他物质。为避免发生沉淀造成营养损失,加入的顺序一般是先加缓冲剂,再依次加入主要元素、微量元素和维生素等;若各种成分均不发生沉淀,也可一起加入。
4.煮汁,去滤液。
马铃薯切成1㎝见方的小块或2~3㎜厚的薄片,加水约1200ml煮沸,再用文火保持20~30分钟、并适当搅拌,使营养物质充分溶解出来,然后用4层预湿的纱布过滤,取其滤液。
5.补足水量,加药品溶化。补足水量至1000ml,然后往滤液中加入琼脂,小火加热,搅拌至琼脂完全溶解,再加入葡萄糖和其他营养物质使其溶化后,用PH试纸检测其PH值,可根据需要使用氢氧化钠和盐酸,调整适宜的酸碱度,进行分装。注意开锅搅拌,防止溢出或焦底。
6.分装试管。
制备好的培养基应趁热分装,可用玻璃试管,首先把较大的玻璃漏斗固定在滴定架上,下接一段乳胶管和玻璃管,用弹簧夹夹住胶管。手拿试管,分装量掌握在试管长度的四分之一。注意分装时,培养基不能粘在试管口壁上,否则会污染棉塞。
7.赛棉塞,注意要松紧适度。
8.高压锅灭菌30分钟。
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