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Hero_AM 2014-11-04 15:58#2
3.仪器
Sepaths-6全自动固相萃取系统（莱伯泰科（美国）公司）； LC600二元高压梯度高效液相色谱； ET氮吹仪（北京莱伯泰科仪器股份有限公司，北京）；VP50真空泵（北京莱伯泰科仪器股份有限公司，北京）；抽滤装置（奥特赛恩斯，天津）。
4.试剂及耗材
试剂：水（屈臣氏的纯净水）；甲醇 （色谱纯）；乙酸乙酯（分析纯）；二氯甲烷（分析纯）；盐酸（分析级）；阿特拉津标准品，纯度99.5%，液体；硅藻土助滤剂；滤膜（中速）；C18固相萃取柱；HLB固相萃取柱；Rapidisk 47mm萃取盘；Supelco ENVI-18固相萃取柱。 -
Hero_AM 2014-11-04 15:58#3
5. 实验过程
5.1 采样要求
5.1.1 每批样品带一个现场空白。
5.1.2 采样地表湖水，取深度为水面下20 ~ 40厘米，将洗净的1L玻璃瓶取水至1L，拧紧瓶盖，采样8瓶。
5.1.3水样送到实验室后，利用抽滤装置连接真空泵将水样过滤，放入中速滤纸，再加入2cm厚度（约5~10g）的硅藻土助滤，如图1。自来水无需过滤，但自来水需要每升水中加入40~50mg亚硫酸钠脱氯，样品4℃避光保存。
图1 水样过滤
5.2 样品前处理
5.2.1把1L水转移至样品瓶中，样品用6mol/L盐酸调节pH小于2，加入5mL甲醇混匀，加入125uL浓度为8ug/mL的内标，样品中内标浓度为1ug/L，立刻混匀。准备Sepaths自动固相萃取，如图2。
图2 固相萃取
5.2.2 活化：每根固相萃取柱活化需依次加入5mL二氯甲烷，5mL乙酸乙酯，10mL甲醇，10mL水。活化时不要让甲醇和水流干，以方便大体积样品水上样。
5.2.3 水样以15mL/min流速流过固相萃取柱。
5.2.4 水样上完后，设置氮气将固相萃取柱干燥一分钟。
5.2.5 用5mL二氯甲烷洗样品瓶后经过小柱收集，在用5mL乙酸乙酯洗样品瓶后经过小柱后收集。
5.2.6 洗脱液于ET浓缩仪上浓缩，如图3，设置温度为45℃，调节氮气流速适中，吹至近干加甲醇定容至1mL准备分析。
图3：氮吹
6. 液相色谱条件
色谱柱：LabtechC18（250 mm×4.6mm，5 μm）
流速：1.0mL/min
紫外检测波长：225nm
进样量：20μL
柱温：25℃
流动相：甲醇/水 体积比6：4
7. 固相萃取小柱的选择
备选小柱C18固相萃取小柱，HLB固相萃取小柱，ENVI-18固相萃取小柱。
首先按照标准选择普通的C18固相萃取小柱，二氯甲烷和乙酸乙酯洗脱，结果不理想，如图4（图中蓝色谱图为标样，黑色谱图为样品），数据结果如表1，回收率小于10%。
图4 普通C18小柱洗脱效果对比
7.1对比样品预处理条件
表1普通C18小柱洗脱
7.2 测试洗脱效果
怀疑阿特拉津是否洗脱完全，对小柱继续用甲醇洗脱，确保洗脱完全，洗脱效果对比标样如图5（图中蓝色谱图为标样，黑色谱图为样品）。
图5 小柱继续用甲醇洗脱对比
接下来采用小体积（10mL）上样，采用5mL二氯甲烷洗脱，证明洗脱效果很好，因此证明是样品中内标物未完全吸附，怀疑是样品体积太大，使得C18固相萃取柱逐渐失去活性。
通过7.1和7.2证明按照标准中采用C18固相萃取小柱对阿特拉津的吸附效果较差。
7.3 采用HLB固相萃取小柱
C18主要官能团是十八烷基，含碳量10%，主要作用力是非极性。HLB是N-乙烯吡咯烷酮-二乙烯基苯聚合物，是一种亲水亲脂平衡共聚物。
HLB吸附剂是由亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物。
HLB固相萃取小柱特点：用于酸性，中性和碱性化合物的通用型吸附剂。吸附剂吸附能力比普通C18柱增大3倍，容量因子大大提高。
7.3.1 活化：每根固相萃取柱活化需加入5mL甲醇，10mL水。活化时不要让甲醇和水流干，以方便大体积样品水上样。
7.3.2 水样以15mL/min流速流过固相萃取柱。
7.3.3 干燥一分钟。
7.3.4 用5mL甲醇洗样品瓶后经过小柱收集，重复2次。
7.3.5洗脱液于ET浓缩仪上浓缩，甚至温度为45℃，调节氮气流速适中，吹至少于1mL，甲醇定容至1mL液相分析如图6（图中蓝色谱图为标样，黑色谱图为样品），数据结果如表2。
图6 HLB小柱固相萃取
表2 HLB小柱萃取结果
经7.3 证明HLB固相萃取小柱吸附效果好于普通C18固相萃取小柱，但是由于《生活饮用水标准检验方法》有机物指标GB/T 5750.8-2006中采用的是C18 固相萃取小柱，所以依照标准还需要采用一种吸附能力更强的且耐酸性C18固相萃取小柱。
7.4采用ENVI-18固相萃取小柱
特点：
1. 多点键合，十八烷基，封尾。
2. 较高的含碳量（17%），增加亲合能力，从而可得到更高的回收率。
3. 较高的含碳量也能更大的耐受苛刻的pH条件。
4. 典型应用在除草剂，杀菌剂，农药和其它含有害物质的水溶液样品中。
按照本文中3.2样品前处理步骤实验回收率稳定。
加标回收，二氯甲烷洗脱，如图7（图中蓝色谱图为标样，黑色谱图为样品），数据结果如表3。
图7 固相萃取色谱图
加标回收，乙酸乙酯洗脱如图8（图中蓝色谱图为标样，黑色谱图为样品）。
图8 固相萃取色谱图
表3 二氯甲烷洗脱数据结果
对比图7和图8，二氯甲烷和乙酸乙酯对目标物的洗脱完全。由于地表水组分复杂，为了避免干扰物的洗脱而影响液相色谱分离，所以采用二氯甲烷洗脱较为理想。
7.5由于许多样品含有颗粒、微小悬浮物，例如地表水，普遍会遇到两个问题：
1)在进行固相萃取时可能会造成萃取柱堵塞。
2)上样量大于1L，由于小柱设置流速要求较慢，造成室验时间太长。
采用C18（47mm，1.4g）萃取盘，如图9。
图9 萃取盘和萃取柱固相萃取盘测试自来水中阿特拉津回收率对比图如图10，（图中蓝色谱图为标样，黑色谱图为样品）数据结果如表4。
图10 萃取盘回收色谱图
表4 萃取盘回收率数据 -
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8. 结论
本文建立并优化了固相萃取-高效液相色谱法分析地表水中阿特拉津的方法。本方法用Supelco ENVI-18固相萃取柱直接对地表水中阿特拉津进行固相富集萃取，萃取后用二氯甲烷直接洗脱收集，吹干后用甲醇定容至1.0mL液相色谱分析。
采用萃取盘富集样品，吸附剂截面积增加，有效避免填料堵塞问题，上样速度高于小柱三倍以上，该方法具有安全、可靠、准确、重现性好、溶剂挥发污染小，能够满足地表水中阿特拉津的测定需要。
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2.参照标准及原理
依照《生活饮用水标准检验方法》有机物指标GB/T5750.8-2006，本方法适用于测定生活饮用水、地表水和地下水。有机物可被C18 固相萃取柱吸附，利用二氯甲烷和乙酸乙酯洗脱，具有良好的稳定性。