关于MLST实验及数据提交
最近忙完实验,忙完文章,发现群里很多战友在问我关于MLST实验及相关数据提交的事情,群里关于这个实验的内容确实不多,现我将我做MLST实验及数据提交的过程与大家分享一下,不足之处希望大家改进。
1、引物设计
我是在PUBMLST网站上找的引物,当然还有其他网站,这和你研究的物种有关系;
2、PCR
我直接采用的网站上的PCR条件,没有修改,其中还是有个别样本PCR结果不符合要求(结果显示两条条带或是条带不亮,暂时没有图片,如有需要,后期可以上传)。这种情况你可以送测序,有的情况是可以测序的。最保险就是重提样本DNA,然后PCR。有时候同一批样本DNA,有个别样本就是有问题,这种情况重提就可以,也就20分钟的时间。
3、测序
测序很花钱,我是双向测序,不过其实MLST管家基因设计基本在800bP以内,测通也可以,不过有钱的情况下建议双向测序,老外要求这样。
测序结果回来,分别将测序结果去掉杂峰,然后双向测序拼接。
拼接的结果在网站上比对,完全匹配,恭喜你,你的实验已经完成。
如果有一个或两个碱基不匹配,这时系统会提示你和某个alle number最接近,这种情况需要重提样本DNA,重PCR然后再次测序比对,如果和上次一样,恭喜你,你发现了一个新的ALLE。一定要重复两次试验。
4、数据提交
在网站上都有编辑的联系方式,建议你在提交数据前先联系编辑,一般他会给你一个模板。还有最重要的一点,千万不要用QQ提交数据,邮件会发不出去,这点我有惨痛及经历,以为编辑退回,结果是邮箱不对。163、sina都可以。
网站上有提交数据的表格,我将我的提交表格以照片形式附在文章最后。
谢谢大家。有问题可以继续交流,邮件我就不一一恢复了,人太多。抱歉。后期我还会分享我做PFGE的惨痛经验,给后来的师弟师妹参考。
2016.12.19
于图书馆
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我想问下您找的第三方是哪家公司,收费如何,谢谢
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我想问下您找的第三方是哪家公司,收费如何,谢谢dxy_tvsy9kow 2016-12-19 17:38#7你好,请问若是可能有新的等位基因,将要重新做的PCR都要求双向测通然后拼接吗?
原味米苏 2016-12-19 17:41#8dxy_tvsy9kow
你好,请问若是可能有新的等位基因,将要重新做的PCR都要求双向测通然后拼接吗?
对的,要重复,确保实验没有准确原味米苏 2016-12-19 17:42#9iceangletree
原味米苏
iceangletree
原味米苏
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我想问下您找的第三方是哪家公司,收费如何,谢谢dxy_tvsy9kow 2016-12-19 18:00#10原味米苏
dxy_tvsy9kow
你好,请问若是可能有新的等位基因,将要重新做的PCR都要求双向测通然后拼接吗?
对的,要重复,确保实验没有准确只正向测通是不可以吗?
希望对大家有帮助