【求助】DNA dot blot

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2014-01-06 12:16 回复:9 关注量:209
各位大仙,有人做过5mC/5hmC的DNA斑点印迹吗?感觉网上的Protocol五花八门的,不知道到底应该怎样做>_< 抗体已经入手很久了,还是没有找到具体的方法。。。="" 哪位大神也是做这方面的呀?急求!!!="">
  • minizoe 2014-01-24 09:59
    #1

    明年也要开始做这个了,和楼主同求~~~

  • shadow123doc 2015-04-12 21:58
    #2

    请问楼主最后怎么做的,我现在也要做这个,不知道该用哪个protocol,不知楼主能否分享经验!谢谢!

  • f小猴子 2017-06-23 11:48
    #3

    想请教下楼主,您当时的DNA是怎么处理的 啊,我最近也需要做,但是不知道具体步骤,说明书写得也不详细

  • lqmxdnll 2017-07-08 22:46
    #4

    f小猴子

    想请教下楼主,您当时的DNA是怎么处理的 啊,我最近也需要做,但是不知道具体步骤,说明书写

    直接把DNA点到NC膜上了

  • f小猴子 2017-07-12 17:33
    #5

    但是说明书上说的是要把DNA超声碎成200-500bp,再点膜。请问碎的时候需要加什么抑制酶吗?还是超声直接碎?或者你是提取细胞基因组DNA后,直接点到膜上就好了?非常感谢!

  • f小猴子 2017-07-17 23:43
    #6

    lqmxdnll

    直接把DNA点到NC膜上

    楼主,急需您的帮忙啊,您是提取DNA后按稀释浓度直接点膜吗?不需要超声将DNA碎成200-500bp吗?




  • lqmxdnll 2017-07-18 16:41
    #7

    f小猴子

    但是说明书上说的是要把DNA超声碎成200-500bp,再点膜。请问碎的时候需要加什么抑制酶吗?还是超声直接碎?或者你是提取细胞基因组DNA后,直接点到膜上就好了?非常感谢!

    超声破碎不用加酶,我其实后来没有做,我当时是没有破碎直接点到膜上的,结果不好看。。。

  • f小猴子 2017-07-18 17:52
    #8

    哦哦,那最后你就没有做这个实验啊?现在不知道这个要不要设阳性对照,我看有文献是用的SSDNA,您之前用的是什么啊?还是直接设几个浓度梯度就好了?

  • liulianran 2018-03-16 16:41
    #9

    同问楼主,我也是用基因组做抗原,然后是检测5-mc,但是看文献图的旁边都有一个亚甲蓝染色的图,不知道这个就是染亚甲蓝的那个也是将同样剂量的基因组点在NC膜上,然后染色吗,具体该怎么染色呢(亚甲蓝的浓度,染色时间啥的),还有染完之后如何看呢,还望博主指导