【求助】如何区分相近大小的条带跪谢！_核酸基因技术讨论圈_商圈

【求助】如何区分相近大小的条带跪谢！

楼主收藏举报帖子创建时间: 2015-10-23 21:52 回复：5 关注量：203

各位大神好！！！小弟最近遇到一个问题，我把融合的基因与T载相连，（融合基因2200bp左右）但在双酶切准备连接表达载体的时候，总出现问题，主要就是跑胶的时候不能将目的基因与T载分开，导致我根本不能将目的基因回收！！！请问有经验的大神，我该怎么办，用多少浓度的琼脂糖？？？？还有电压多久？？？？？多长时间能分开？？？？跪谢！！！小弟明年就毕业了，还望各位鼎力相助！！！

mpark 2015-10-25 00:41
#1

How big the T vector is? Do you have any gel picture?
菜花不止会踢球 2015-10-26 09:34
#2

T载用的pmd19-T 大概2700左右，我用的1%的胶跑了大概40分钟还是分不开感觉有分开的趋势但是很模糊
mpark 2015-10-26 16:03
#3

Try to make a 1% long gel and load each well with 0.2-0.4 ug of digested plasmid for 10 wells or 15 wells. Run gel at 20 voltage and 30 mA at room temperature for 12-16 hours in 1 x TAE.
菜花不止会踢球 2015-10-26 20:51
#4

Thank U! I'll try !
没啥好聊 2018-03-16 19:17
#5

请问你区分开了没？如何区分？

菜花不止会踢球帖子创建时间: 2015-10-26 09:34

T载用的pmd19-T 大概2700左右，我用的1%的胶跑了大概40分钟还是分不开感觉有分开的趋势但是很模糊

mpark 帖子创建时间: 2015-10-26 16:03

Try to make a 1% long gel and load each well with 0.2-0.4 ug of digested plasmid for 10 wells or 15 wells. Run gel at 20 voltage and 30 mA at room temperature for 12-16 hours in 1 x TAE.