【求助】组织 RT-PCR，内参不齐，GAPDH甚至26CT值，求解！
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ursula-zhao 2015-05-05 12:28#2
管家基因不是随便拿来就能用的。你自己多看看，即便是同样的管家基因，但在不同疾病或者药物治疗下与正常人相比还是有改变的。尤其是不同的模型所选用的管家基因也不相一致。
最简便的方法就是看老外做过相关的实验，人家用什么做管家基因，这样能节省很多弯路和精力。 -
哈哈公子 2016-07-06 17:45#3请问你最后做出来的内参CT值跨度怎样？我做的大鼠组织，CT值21-26都有，怀疑是个体差异吧。。。大家是怎么看的?
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黯淡蓝点 2016-07-09 23:41#4我做的肠癌，用的actin做内参也是的，怎么都跑不齐，内参一定要齐吗？看到有人说不一定要跑齐，内参就是为了解决加样量不同的问题。
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医学生mlh 2016-11-24 14:01#5请问楼主现在这个问题解决了吗？我也遇到同样的问题
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医学生mlh 2016-11-26 10:12#6
请问楼主是怎么解决这个问题的呢，我现在也遇到这个问题了，好焦虑
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wangling11 2016-12-30 14:14#7
请问楼主解决了吗？同求这个问题
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小路小鹿还有小露 2017-01-09 19:25#8用18S
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wangqi19930103 2017-10-29 16:17#9
小路小鹿还有小露
神奇的战友们，本人最近跑组织PCR，最近几次发现癌和癌旁两组的内参GAPDH参差不齐，16-26CT值不等，所以我换了新的GAPDH，序列是GAPDH FORWARD CTGCACCACCAACTGCTTAG REVERSE GTCTTCTGGGTGGCAGTGAT, 加了个ACTIN内参，用了2个病人检验结果还可以，但是昨天跑了，竟然20个病人都还是这样，4个月的标本损失惨重，还有一个发现最近2块板发现，癌旁的内参都在20几CT值，癌的内参在18左右，目的基因相差不多，这样算下来，趋势就是反的，请求战友给予我帮助，帮我找出问题，不甚感谢！我的天啊，，，楼主，我的问题和你惊人的 相似，，，我做的肺癌，也是癌组织内参16,17,18，20.。。然后癌旁基本都是22，，，然后我的结果和免疫组化也反了。。。咋办啊？？？您后来怎么解决的啊，，，求答复感谢感谢。。。
另外，我用GAPDH和ACTIN各做了一次，用的是同一批样本，但ACTIN那个峰不太好，，，两次数据结果，其实相差并不是很多，最终结果，还是相反。。。非常想和楼主交流一下。。。
QQ‘274626948’
所以我现在想换内参重新做一下，，前天重新提了一遍RNA。。。有人说，可以适当提高内参癌旁的浓度，还有自己设一个梯度，看那个浓度能把CQ值控制在18-20,,或者说，小于21.。。楼主听过这样的做法吗，，，，
下图是我最近做的数据，
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boli2SKH 2018-03-16 14:53#10黯淡蓝点
我做的肠癌，用的actin做内参也是的，怎么都跑不齐，内参一定要齐吗？看到有人说不一定要跑齐，内参就是为了解决加样量不同的问题。
我做的也是肠癌，是肿瘤组织，内参跑出来也不齐，请问你最后解决了内参不齐的问题了吗？内参不齐可以用吗
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管家基因不是随便拿来就能用的。你自己多看看，即便是同样的管家基因，但在不同疾病或者药物治疗下与正常人相比还是有改变的。尤其是不同的模型所选用的管家基因也不相一致。
最简便的方法就是看老外做过相关的实验，人家用什么做管家基因，这样能节省很多弯路和精力。