【求助】细胞免疫荧光染色,蛋白定位异常的问题请教

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2011-12-13 21:48 回复:4 关注量:156
做中性粒细胞胞浆内一种蛋白的免疫荧光染色,二抗是FITC标记的,用DAPI复染。
用激光共聚焦显微镜观察,原本应该在细胞浆内的绿色荧光出现在细胞核内,胞浆内无目的绿色荧光,与DAPI的定位完全一致。请教这是为什么呢?
步骤如下:
1.分离人外周血中性粒细胞,计数并涂片
2.多聚甲醛固定后曲拉通打孔
3.脱脂奶粉封闭
4.一抗37度1小时,二抗37度1小时
5.DAPI复染10分钟
6.激光共聚焦观察

溶液均为PBS配置
  • wwwwky 2011-12-14 08:38
    #1

    请大家帮帮忙啊

  • jixiaoqin 2013-01-10 23:02
    #2

    不知你的问题解决了没?我今天做免疫荧光遇到同样的问题,应该胞浆表达的抗体却是胞核表达。。。。
    请问这是为什吗?

  • 晚点航班 2014-01-20 14:16
    #3

    请问您的问题解决了没有,我现在出现了和您一样的情况,求指教!

  • 姜jia伟 2018-03-16 21:54
    #4

    你好,请问后来问题解决了吗?我遇到了同样的问题