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Fuyuanbio 2018-03-07 14:46#2条带多是抗体的问题，不一定是错的，但一定是这个的原因。你的图不好看，是操作问题，不均匀。
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chao_yw 2018-03-08 14:19#3
楼上正解，推荐一篇wb操作方面的综述吧：
https://www.labome.com/method/Western-Blot-Protocol-Troubleshootings-and-Survey-Results-on-Instruments-and-Reagents.html
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竹子flower 2018-03-08 15:13#4有可能抗体是多克隆抗体，目标蛋白存在亚型，如果分子量是对的，那应该没问题。背景颜色太深封闭的时间应该长一些
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mi_cun 2018-03-09 16:50#5封闭时间太短，背景太深了
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liujing860131 2018-03-09 22:53#6mi_cun
封闭时间太短，背景太深了
背景深是什么原因？用软件调整也调整不好
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rankaikai319 2018-03-12 10:47#7
看着楼主的问题，觉得WB背景很深，一个是抗体封面的问题，可能封闭时间过长洗膜不充分，导致非特异性蛋白的结合。另外，抗体特异性不是很好，条带多，不清楚主带。希望对你有帮助
楼主可把Marker标注清楚，自己的分子量以及实验的条件写明，大家好帮你找问题
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宸之遥 2018-03-15 21:44#8foreverpang
抗体不特异或者是本来就有两条带，看位置是否正确
估计抗体特异性不好，用的Bioworld的抗体，用鼠的细胞还可以，这图是人的细胞，估计特异性不好吧
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宸之遥 2018-03-15 21:46#9
rankaikai319
看着楼主的问题，觉得WB背景很深，一个是抗体封面的问题，可能封闭时间过长洗膜不充分，导致非特异性蛋白的结合。另外，抗体特异性不是很好，条带多，不清楚主带。希望对你有帮助
楼主可把Marker标注清楚，自己的分子量以及实验的条件写明，大家好帮你找问题
封闭了2个小时，是不是封闭时间太长了曝光的时候比较难曝，也会导致背景比较深？这个条带都是目标蛋白，没有MARKER
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宸之遥 2018-03-15 21:46#10
mi_cun
封闭时间太短，背景太深了
封闭了2个小时...
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抗体不特异或者是本来就有两条带，看位置是否正确