转染试剂的那些事儿

转染技术新宠-阳离子聚合物基因转染技术

适用宿主广泛，操作简便，细胞毒性小，转染率高。其中聚乙烯亚胺（PEI）的转染性能最好。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，就是第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何PH下都能充当有效的“质子海绵”体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，而且细胞毒性低。大量实验证明，PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时，PEI经常做为核心组成成分。

线性聚乙烯亚胺（Line PEI）转染复合物的细胞毒性低，有利于细胞定位，而且转染率极高。

Polyscience公司的两款明星产品线性聚乙烯亚胺（23966-1和24765-1）近年来越来越多的受到研究者们的青睐。其产品被运用到大量的转染实验中，也出现在大量的文献中。

Polyscience公司成立于1961年，总部位于宾夕法尼亚州沃灵顿，是一家生产研发化学产品的公司。该公司的产品种类已经累计超过3000种，其产品的特点是体积小，附加值高。

公司产品主要包含：

1、  单体和聚合物

2、  微球和粒子（有机、无机、可生物降解、磁珠、荧光素、染料、特异性抗体和蛋白包被颗粒，直径从40nm到10mm）用于核酸提取、蛋白分离和纯化等。

3、  高性能粘合剂、涂料和密封剂

23966-1

Polyethylenimine,Linear,MW25000

Transfection Grade (PEI 25K)

24765-1（更高效的PEI聚乙烯亚胺聚合物转染试剂）

PEIMAX-Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride

(MW 40000)

PolyethylenimineHClMAX,Linear,Mw40000（PEI40000）是热卖产品线性化聚乙烯亚胺PEI25000的升级产品，不同之处在于1）完全水解（去乙酰化）；2）PEI25000的盐酸盐形式，具更高的水溶特性；3）含更长连续性乙烯亚胺（ethyleneimine）片段，其质子化氮水平比PEI25000提高11%以上。本品经碱中和后，可转化为线性化自由胺（PEI),此时分子量正相当于25000。

ThomasM,etal（2005）研究数据表明,去乙酰化的PEI40000（PolyethylenimineMAX40000）体外质粒DNA转染效率提高21倍，小鼠体内靶向效率达到10,000倍，随之肺部特异疗效显示增强1500倍。

使用方法（仅供参考）

1. Pour ~450 mL of Milli-Q H2O into a 500-mL glass beaker.

2. Add 500 mg of PEI to the beaker with stirring.

3. Add concentrated HCl drop-wise to the solution to pH <2.0.

4. Stir until the PEI is dissolved (~2-3 h). Maintain the pH <2.0 throughout.

Approximately 800 μL of 12 M HCl will be required for full PEI dissolution. There may still be some small fiber particles that will not dissolve.

5. Add concentrated NaOH drop-wise to the solution to pH 7.0.

Approximately 500 μL of 10 M NaOH will be required to neutralize the PEI solution.

6. Pour the solution into a 500-mL glass cylinder. Adjust the final volume to 500 mL with Milli-Q H2O.

7. Filter-sterilize the solution through a 0.22-μm membrane.

8. Store aliquots of the desired volume at -20°C.

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