用新工具快速测量肺癌的检查点抑制剂水平

评估由非小细胞肺(NSCLC)肿瘤表达的程序性死亡配体1(PD-L1)的水平可以帮助临床医生确定应如何治疗患者。现在，研究人员在“分子诊断杂志 ”上报道了一种“ 使用单一非小细胞肺癌(NSCLC)支气管镜检查试样检测程序性死亡配体1(PD-L1)状态和多种肿瘤突变的新方法 ” ，用于量化肿瘤中PD-L1表达水平的新颖且快速的方法，其仅需要可使用微创支气管镜检查技术收集的少量组织。该技术还可用于区分恶性肿瘤和良性肿瘤并鉴定突变状态，所有这些都可以指导和改进治疗决策。

“正在评估多种生物标志物以指导免疫检查点抑制剂在非小细胞肺癌(NSCLC)中的应用，包括程序性死亡配体1(PD-L1)肿瘤细胞染色。我们开发了一种新方法，可以准确地量化PD-L1状态，并通过使用单个支气管镜检查样本识别多个突变。一种新的分子标记物被鉴定为检测来自NSCLC(n = 15)和良性(n)的径向支气管内超声支气管刷的恶性细胞的存在。= 13)通过定量实时RT-PCR(RT-qPCR)的结节。MMP9：TIMP3转录比在NSCLC中显着增加，并使用接受者操作特征曲线分析准确区分恶性和良性支气管镜检查标本(曲线下面积= 0.98; 95%CI，0.93-1; P <0.0001)，“研究者写道。

“利用相同的标本，通过RT-qPCR和下一代测序检测PD-L1表达和多种致癌突变。使用具有匹配的福尔马林固定的石蜡包埋的载玻片的快速冷冻鳞状细胞癌(n = 40)和对照(n = 20)活组织检查的第二档体通过免疫组织化学和RT-qPCR比较PD-L1状态。活组织检查证实MMP-9：TIMP3比值可预测恶性肿瘤，并证明PD-​​L1转录物表达与NSCLC中PD-L1肿瘤细胞膜染色一致(Spearman r = 0.636，P <0.0001)。这种快速的分子方法可以检测恶性细胞，使用相同的单一支气管镜检查样本可以生成高质量的未固定核酸，可以准确地量化PD-L1状态并识别多种致癌突变。“

“肺癌筛查试验的出现将导致对确定可疑肺结节的分子性质的更大需求。该测试有可能节省大量时间和金钱，以确定最有可能从检查点抑制剂如pembrolizumab中受益的患者，“RMIT大学健康与生物医学科学学院临床科学副教授Steven Bozinovski博士解释说。 。

在使用刷子或活组织检查径向探针支气管内超声(EBUS)收集支气管镜检查样本后，在对恶性部位进行快速现场评估之后，将少量组织直接置于核酸稳定缓冲液中。从标本中分离RNA和DNA，并进行测定以定量基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其内源性抑制剂(TIMP3)的表达。Bozinovski继续进行，测试本身可以很快进行，因此可以在收集后数小时内确定恶性肿瘤和PD-L1状态的诊断。他补充说，测试和评分可以很容易地自动化，以消除测试仪的可变性。

“在这项研究中，我们首次证明了MMP-9：TIMP3的比例可以准确地区分恶性组织和非恶性组织标本，而无需固定组织进行组织学评估，”Bozinovski解释说。在一个案例中，MMP9：TIMP3比率升高超过300次，而细胞学检查正常。九个月后，重复细胞学证实肿瘤确实是恶性的。

该测定还量化PD-L1转录物水平，其可对NSCLC的临床管理具有重要影响。Pembrolizumab已获FDA批准用于晚期NSCLC患者的一线治疗，其使用SP263免疫组织化学测试确定其肿瘤具有50%或更高的PD-L1表达。具有较低PD-L1表达水平的患者更可能受益于pembrolizumab和化学疗法的组合。

研究人员表示，该研究显示，通过新试验测定的PD-L1转录水平与FDA批准的SP263免疫组织化学之间存在强烈的正相关性，他们补充说，同一样本中应有足够的基因组DNA可供多面板使用。靶向下一代测序以评估肿瘤的总突变负荷。重要的是，这是可能的，因为组织是未固定的，保持了DNA和RNA的完整性。

在本报告中，在大多数EBUS肿瘤标本中检测到突变，包括在15个NSCLC样本中的10个中发现的TP53基因突变。此类信息可以进一步细化患者对特定治疗方案的选择。

Bozinovski指出，该测试提供了额外的优势，包括快速周转时间和自动分析。“我们相信我们的测试应该显着增强EBUS引导支气管镜检查标本对肺癌患者分子检测的诊断效用，”他说。