求教蛋白半衰期测定

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2018-03-15 21:54 回复:4 关注量:177

我们细胞给药处理后1种目标蛋白降低明显,我们想知道这种蛋白是合成减少了还是降解增多了?给MG132处理过好几次之后竟然目标蛋白降低了,这不应该啊...

  • yang_nj 2018-03-16 09:03
    #1

    验证是否蛋白生成减少了,看下蛋白mRNA表达是否减少,如果减少证明是

    蛋白生成减少

  • 麦克林托克 2018-03-16 10:36
    #2

    用chx处理,chx抑制蛋白合成,做时间梯度后,如果逐渐减少了就是降解了。一般mg132处理只有几个小时,看的是ub的水平。不知道你mg132是什么浓度处理多久

  • 宸之遥 2018-03-16 12:34
    #3

    麦克林托克

    用chx处理,chx抑制蛋白合成,做时间梯度后,如果逐渐减少了就是降解了。一般mg132处理只有几个小时,看的是ub的水平。不知道你mg132是什么浓度处理多久

    MG132我是1umol/L的浓度,处理了12小时,如果降解途径被抑制的话总量应该是增加的,我做出来的几次都是减少的,哎...

  • 宸之遥 2018-03-16 12:35
    #4

    yang_nj

    验证是否蛋白生成减少了,看下蛋白mRNA表达是否减少,如果减少证明是

    蛋白生成减少

    做过PCR,确实是降解的,蛋白合成没变化