大家好，我现在有一个疑问：如果我们将一条不是很长的基因的DNA插入到可以在人体细胞内表达的载体中，那么这个基因转录的时候会不会被剪切到内含子？

因为我有一个剪接位点的突变，但由于各种原因，没有办法提取到病人的总RNA，所以想通过体外实验的方法看看这个突变有么有影响这个基因的剪接，所以想将这个基因的内含子连同外显子一起插入到质粒之中，不知道这样可以不。

请各位大神给予指导。小女子不胜感激。

大家好，我现在有一个疑问：如果我们将一条不是很长的基因的DNA插入到可以在人体细胞内表达的载体中，那么这个基因转录的时候会不会被剪切到内含子？

因为我有一个剪接位点的突变，但由于各种原因，没有办法提取到病人的总RNA，所以想通过体外实验的方法看看这个突变有么有影响这个基因的剪接，所以想将这个基因的内含子连同外显子一起插入到质粒之中，不知道这样可以不。

请各位大神给予指导。小女子不胜感激。

因为我有一个剪接位点的突变, do you mean you have found a mutation in a splicing lement in some gene?

所以想将这个基因的内含子连同外显子一起插入到质粒之中: yes, you do. Make sure that the whole length of DNA fragment is within 17 kb for subcloning into an expressing vector.

非常感谢您的回复，还有一些问题，麻烦您回答下：

就是我的目的基因包含20个外显子，this mutation in a splicing lement ,是在,17和18个外显子地方的剪接位点，比较靠后，我可以只将外显子17,18，连同他俩之间的内含子一起插入到载体中，这样的话，构成的质粒就会比较小，不然可能太大了，但是不知道这样做的话，会不会影响转录，所以这个想法暂时只是设想，不知道其可行性。

谢谢您百忙之中给予的回复

然后，插入之后，转染到细胞系之中，在细胞内，这个内含子是可以被剪切掉的是么？

Your plan is fine. Try to clone the genomic DNA containing the region you are studying, spficically try to clone DNA carrying that splicing mutation. You have to do transfection and test if the splicing mutation causes wrong transcript processing.

非常感谢您的回复，谢谢！

可以的

大家好，我也有同样的问题，构建的含有内含子的质粒转然后好不好被剪切掉啊？