是这样的首先是确定你提的质粒本身是高copy还是低copy的。低copy那没话说了，就这样。我想应该是高copy的质粒用于大提。其次问题看你的菌浓度即菌每次长的如何，好的话，看看抗生素的浓度对对不对，是否时间太太久了。一切没问题的话。那就是你操作的问题了，其实没有什么关键的步骤，最关键的是第二步加S2的时候时间要卡准，好象是4分钟半（<5min），另外一个重要的是加入s3时要下点力气晃得剧烈点，别担心DNA断裂，他不是人得那么脆弱，杆菌是园得呵呵使点劲没事。
要是还有问题就发信吧wuruofei2000@hotmail.com

我论文中的片段，希望对你有帮助
挑取已鉴定的新鲜重组质粒菌落，接种于3ml含有50μg/mL卡拉霉素的LB 液体培养基中，37℃恒温摇床中振荡过夜、以1:500 接种于100mL的2YT 培养基中，37℃ 200转振荡培养。8～10小时后大部分细菌已至对数生长晚期，补充新鲜的2YT 培养基50mL，并加入终浓度为170μg/mL的氯霉素以扩增质粒。氯霉素可以增加质粒产量并抑制菌体蛋白的合成，有利于下一步的菌体裂解。
后面按照分子克隆指南操作。
需要注意以下几个方面：
1、大提质粒最好用2YT培养基，营养比LB好。提质粒时，细菌的生长状态是最关键的。
2、8～10小时后补加1/2体积的2YT和氯霉素。
3、加S3时的确不能摇晃的太剧烈，尤其是涡旋震荡产生的剪切力对DNA的损伤更大。剧烈震荡虽然可以使细菌充分裂解，但是DNA被打断后，用于转染的效率是非常低的。

楼主 请问你的问题解决了吗 我现在用的全式金试剂盒大提质粒 也遇到了跟你同样的问题 提完的质粒浓度很低 请问一些会是什么样的问题造成的呢？