以cDNA为模板的pcr,模板用量是多少

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2017-05-10 10:25 回复:10 关注量:366

mix说明书上对各种模板都有量的要求,但是以cDNA为模板只是说不超过体积的十分之一,但是每个人提的cDNA浓度不一样,最后用的量也会有差异吧,很疑惑有没有大神解答一下小白的问题

  • 静镆 2017-05-10 10:44
    #1

    Ryuboon

    mix说明书上对各种模板都有量的要求,但是以cDNA为模板只是说不超过体积的十分之一,但是每个人提的cDNA浓度不一样,最后用的量也会有差异吧,很疑惑有没有大神解答一下小白的问题


    200ng到600ng

  • 静镆 2017-05-10 10:47
    #2

    Ryuboon

    mix说明书上对各种模板都有量的要求,但是以cDNA为模板只是说不超过体积的十分之一,但是每个人提的cDNA浓度不一样,最后用的量也会有差异吧,很疑惑有没有大神解答一下小白的问题


    我一般反转录模板量1ug mRNA,反转录以后荧光定量稀释5倍,10ul体系用2ul稀释液

  • Ryuboon 2017-05-10 11:05
    #3

    静镆

    我一般反转录模板量1ug mRNA,反转录以后荧光定量稀释5倍,10ul体系用2ul稀释液
    翻转录后不用测一下cDNA浓度来确定加多少量吗?你这样是加了400左右?


  • Ryuboon 2017-05-10 11:05
    #4

    翻转录后不用测一下cDNA浓度来确定加多少量吗?你这样是加了400左右?

  • Ryuboon 2017-05-10 11:06
    #5

    静镆

    我一般反转录模板量1ug mRNA,反转录以后荧光定量稀释5倍,10ul体系用2ul稀释液

    翻转录后不用测一下cDNA浓度来确定加多少量吗?你这样是加了400左右?

  • 静镆 2017-05-10 16:18
    #6

    Ryuboon

    翻转录后不用测一下cDNA浓度来确定加多少量吗?你这样是加了400左右?


    差不多,我一般还是会测一下,但是,cDNA的浓度跟mRNA的模板浓度基本是一致的,加1ug的话最后差不多就是1ug/ul,你也可以测一下

  • 5945笑笑 2017-11-18 09:53
    #7

    静镆

    差不多,我一般还是会测一下,但是,cDNA的浓度跟mRNA的模板浓度基本是一致的,加1ug的话最后差不多就是1ug/ul,你也可以测一下

    请问我最近PCR效果不太好也测了一下,1ugmRNA,20ul逆转体系测出DNA是2000ng/ul

  • 静镆 2017-11-21 08:25
    #8

    5945笑笑

    请问我最近PCR效果不太好也测了一下,1ugmRNA,20ul逆转体系测出DNA是2000ng/ul


    建议跑个电泳看一下RNA质量

  • 5945笑笑 2017-11-21 11:16
    #9

    静镆

    建议跑个电泳看一下RNA质量

    好的,谢谢你。

  • zx19940201 2018-03-15 16:01
    #10

    5945笑笑

    请问我最近PCR效果不太好也测了一下,1ugmRNA,20ul逆转体系测出DNA是2000ng/ul


    请问1ugRNA是多少ul