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份 库存999份
| 货号： | TD422-10 |
| 供应商： | 天漠科技 |
| 英文名： | TIANMO BIOTECH |
| 保质期： | 1年 |
| 保存条件： | 室温 |
| 规格： | 10次 |
质粒DNA大量提取试剂盒
Catalog No. TD422-10 (10次反应) TD422-20 (20次反应)
产品组成:
| 试剂盒组成 | 保存 | 10次 | 20次 | |
| RNase A | －20℃ | 15 mg | 2 X 15 mg | |
| P1 | 4℃ | 150 ml | 2 X 150 ml | |
| P2 | 室温 | 150 ml | 2 X 150 ml | |
| P3（黄色） | 室温 | 150 ml | 2 X 150 ml | |
| 质粒DNA结合液 | 室温 | 150 ml | 2 X 150 ml | |
| 质粒DNA洗涤液1 | 室温 | 55 ml 2 X 100 ml | ||
| 质粒DNA洗涤液2 | 室温 | 25 ml 2 X 25 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 | ||
| 质粒DNA洗脱液 | 室温 | 10ml | 20ml | |
| 5号柱P套装 | 室温 | 10个 | 20个 | |
| 注射器套装 | 室温 | 10个 | 20个 | |
| 收集管 | 室温 | 10个 | 20个 | |
产品特点:
- 独有的显色反应，可以直接观察到细胞裂解中和的程度，极大方便操作者判断其状态。
- 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒DNA产量高、纯度好，且内毒素含量极低。 可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序 转染等各种分子生物学实验。
- 此产品仅供科研使用。
注意事项:
- 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
- 溶液P3和结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
- 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
特性:
- DNA 纯度: 获得的质粒产量高、纯度好， 可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等
- 。一般情况Abs260/280 ≥ 1.8 ，Abs260/230 ≥ 2.0，内毒素含量小于1EU/µg 。
- 质粒DNA产量: 每次可提取到约 1.2 mg ，主要依据质粒的拷贝数，培养物的成长环境等因素。
- 质粒DNA大小: 最高可达25 kb。
- 洗脱体积: ≥ 200 µl。
- 操作温度: 室温 (15-30°C)。
- 操作时间：20分钟
溶液制备:（使用之前需要配制）
- 第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。
试用装的P1已添加过RNaseA
- 2次试用装 的 质粒DNA洗涤液 2已经添加乙醇无需添加。
20次反应的 质粒DNA洗涤液 2应添加60 ml 100%的乙醇到15ml的质粒DNA洗涤液2中。
加入后请及时在方框打钩标记，以免多次加入!
操作步骤:
- 取150 ml过夜培养的菌液，在≥ 3,400 x g离心力下离心10分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。
- 用14ml溶液P1重悬菌体沉淀，可用吸头反复吹打或涡旋振荡至彻底悬浮。
- 加14ml的溶液P2，温和地上下翻转4 -7次使菌体充分裂解，室温放置2-3分钟。
- 加14ml溶液P3（预冷），立即温和地上下翻转4 -7次，中和完全后会出现黄色絮状沉淀。（中和完全后溶液完全呈现为黄色）
- 将一个50ml离心管放在离心管架子上准备收集过滤液，然后把注射器下端的接头拧开并将上一步混合物慢慢倒入注射器内，将注射器推杆推入注射器内慢慢推动收集过滤液（大约会收集到35ml左右的过滤液）。
- 然后在过滤液中加入14ml质粒DNA结合液，盖上盖子颠倒10次左右使其混匀。
以下步骤可以通过真空负压的方式也可以通过离心的方式进行操作（负压设备所用真空多连器推荐美国ZYMO RESEARCH公司）
负压操作步骤：
1．确认5号柱P（连接15ml和50ml套筒）连接紧密后放置在负压多连器上，倒入第6步的混合液，打开真空开关使液体完全通过柱子。
2．去掉50ml套筒。
3．关掉真空开关，倒入5ml质粒洗涤液1到15ml套筒内，打开真空开关，让液体完全通过柱子。
4．关掉真空开关，加入5ml质粒DNA洗涤液2（请先检查是否已加入无水乙醇!）到15ml套筒内，打开真空开关
让液体完全通过柱子。
5．重复第4步。
6．去掉15ml套筒，将5号柱P套在2ml收集管上，然后放置在台式离心机上在≥ 10,000 x g 条件下空转2分钟以去除残留乙醇。
7．将5号柱P套在一个干净的1.5ml离心管内，添加400ul的质粒DNA洗脱液到柱基质上。（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热，洗脱效果更好），室温放置2分钟，在≥ 10,000 x g 条件下离心1分钟来洗脱质粒DNA。
离心操作步骤：
1．确认5号柱P（连接15ml套筒）连接紧密后放置在一个50ml离心管里，倒入14ml第6步的混合液，500 x g离心力下离心2分钟，倒掉离心管中的混合液，重复此步骤直到过滤液全部倒净。
2．加入5ml质粒洗涤液1，500 x g离心力下离心2分钟，弃废液。
3．加入5ml质粒DNA洗涤液2（请先检查是否已加入无水乙醇!），500 x g离心力下离心2分钟，弃掉废液。
4．重复第9步。
5．去掉15ml套筒，将5号柱P套在2ml收集管上，然后放置在台式离心机上在≥ 10,000 x g 条件下空转2分钟以去除残留乙醇。
6．将5号柱P套在一个干净的1.5ml离心管内，添加400ul的质粒DNA洗脱液到柱基质上。（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热，洗脱效果更好），室温放置2分钟，在≥ 10,000 x g 条件下离心1分钟来洗脱质粒DNA。
温馨提示：不可用于临床治疗。
通过朝阳分局认证 
