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| 货号： | RS20161201 |
细胞增殖活性实验（CCK-8）
活动规则：1mlCCK-8只需100元，买5ml送1ml，买10ml送2ml，时间有限，购买越多，优惠越多！
应用：肿瘤细胞增殖活性的检测
目的基因瞬转/稳转细胞系的细胞增殖活性研究
小分子化合物/多肽等药物筛选及功能安全性研究
中药/中间体等药物筛选及功能安全性研究
目的基因过表达的基因功能研究
目的基因RNAi干扰的基因功能研究
microRNA过表达/干扰的调控机制研究
产品简介：
CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏
度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂1-MethoxyPMS存在的情况下，可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜（Formazan）(图1)。细胞增殖越多越快，则
颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目
呈线性关系。
产品优势：
本试剂盒提供了一种灵敏度高、操作简便、使用安全的细胞增殖与毒性检测方法。与传统的MTT实验相比具有明显的优势：
- CCK-8法是用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有
增殖相关的实验的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。
- CCK-8法对细胞无毒性，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT方法相比线性
CCK-8溶液不需配制，可以直接加入到细胞样品中，即开即用，比MTT更加稳定，
实验结果重复性好，适合大规模，高通量的样品检测。
- MTT实验生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解；而本方法产生的formazan是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步
贮藏条件：
CCK-8溶液在避光、0-5℃的条件下可以保存1年，若长期不用可在-20℃下避光保存2年。建议分装后保存于-20℃，使用时提前于4℃解冻，请避免反复冻融，否则增加
背景值，干扰实验结果
使用方法：
1.在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。
2.按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如:6,12,24或48小时)。
3.每孔加入10ulCCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ulCCK-8溶液，以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。
4.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
5.用酶标仪测定在450nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
6.如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul0.1MHCl溶液或者1%w/v的SDS溶液，避光保存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。
注意事项：
1.使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。同时，可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。
2.培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8试剂后的培养时间。
3.铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8溶液充分混匀。
4.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
5.加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。
6.用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。7.本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中，请在生物安全柜内无菌操作，避免污染。8.为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。
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