点击图片查看原图
氟***尼考快速检测试剂盒说明书一、原理本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物氟***尼考将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氟***尼考抗体，加入酶标记物后，用 TMB 底物显色，样本吸光值与其所含残留物氟***尼考的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物氟***尼考的含量。二、试剂盒特性试剂盒灵敏度： 0.1ppb 孵育温度： 25℃ 孵育时间： 30min～15min样本检测下限蜂蜜、组织 0.1ppb牛奶 0.2ppb交叉反应率氟***尼考 100%甲砜霉素 < 0.1%="" 氟***尼考胺="" 11%="" 氯霉素="">< 0.1%="" 样本回收率="" 组="" 织="" 90%±30%="" 蜂="" 蜜="" 90%±30%="" 牛="" 奶="" 90%±30%="" 三、试剂盒组成="" 1="" 微量测试孔="" 每条="" 8="" 孔，一板="" 12="" 条="" 标准液×6="" 瓶="" 0ppb="" 0.1ppb="" 2="" 0.2ppb="" 0.4ppb="" （1ml/瓶）="" 0.8ppb="" 1.6ppb="" 3="" 酶标记物="" 7ml="" 红色帽="" 4="" 抗体工作液="" 7ml="" 蓝色帽="" 5="" 底物="" a="" 液="" 7ml="" 白色帽="" 6="" 底物="" b="" 液="" 7ml="" 黑色帽="" 7="" 终止液="" 7ml="" 黄色帽="" 8="" 20x="" 浓缩洗涤液="" 40ml="" 白色帽="" 9="" 2x="" 浓缩复溶液="" 50ml="" 透明帽="" 四、所用仪器、试剂="" 具备的仪器：酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量="" 0.01g）、氮吹仪、恒温箱="" 微量移液器：单道="" 20～200l、单道="" 100～1000l、="" 多道="" 30～300="" l="" 试="" 剂：乙酸乙酯、正己烷、乙*="" 五、样本前处理步骤="" 样本处理前须知="" （a）实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。="" （b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。="" 样本前处理需配制：="" 配液="" 1="" 样本复溶液：="" 将="" 2x="" 浓缩复溶液用去离子水按="" 1：1="" 稀释。="" (1="" 份浓缩复溶掖+1="" 份去离子水)。="" 配液="" 2="" 样本提取液：="" 将乙*与乙酸乙酯按="" 1:2="" 比例混合均匀（1="" 份乙*+2="" 份乙酸乙酯）。="" 样本处理：="" （a）组织="" (鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)样本处理方法="" 1、称取均质后的样本="" 3±0.05g="" 于="" 50ml="" 离心管中，先加入="" 3ml="" 去离子水混匀后再加入="" 6ml="" 乙酸乙酯，振荡="" 2min，室温="" 4000r/min="" 以上离心="" 10min；="" 2、取出="" 2ml="" 上层液体在="" 50-60℃氮气流中吹干；="" 3、加入="" 2="" ml="" 正己烷溶解干燥的残留物，再加="" 1ml="" 样本复溶液混合="" 30s，室温="" 4000r/min="" 以上离心5min；去除上层有机相；="" 4、取="" 50="" l="" 下层相用于分析="" 样本稀释倍数:="" 1="" 倍="" （b）蜂蜜处理方法="" 1、取="" 2±0.05="" g="" 蜂蜜，放入离心管中，用="" 4ml="" 去离子水溶解；加入="" 4ml="" 乙酸乙酯振荡="" 2min，室温="" 4000r/min="" 以上离心="" 10min；2、移取="" 2ml="" 上层清澈液到另一离心管中，50-60℃="" 氮气流下干燥；用="" 1ml="" 样本复溶液溶解干燥的残留物，混合="" 30s；="" 3、取="" 50="" l="" 用于分析。="" 样本稀释倍数：="" 1="" 倍="" （c）牛奶样本处理方法="" 1、="" 吸取均质后的牛奶样本="" 1ml="" 于="" 5ml="" 离心管中，加="" 入="" 2ml="" 样本提取液（配液="" 2）振荡="" 1min，="" 室温="" 4000r/min="" 以上离心="" 10min；2、="" 取出="" 1ml="" 上层液体在="" 50-60℃氮气流中吹干；="" 3、加入="" 1="" ml="" 正己烷溶解干燥的残留物，再加="" 1ml="" 样本复溶液混合="" 30s，室温="" 4000r/min="" 以上离心5min；去除上层有机相；="" 4、="" 取="" 50="" l="" 下层相用于分析。="" 样本稀释倍数:="" 2="" 倍="" 六、酶标免疫分析程序:="" 测定前应须知：="" 1、="" 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温="" （20～25℃）。="" 2、="" 使用之后立即将所有试剂放回="" 2～8℃。="" 3、="" 在="" elisa="" 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是="" elisa="" 测定程序中的要点。="" 4、="" 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。="" 操作步骤：="" 1、从="" 2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～="" 25℃）平衡="" 30min="" 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。="" 2、取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放="" 入自封袋，保存于="" 2-8℃。="" 3、配液：将="" 40ml="" 浓缩洗涤液（20="" 倍浓缩）用去离子水按照="" 1：19="" 稀释（1="" 份浓缩洗涤液+19="" 份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。="" 4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做="" 2="" 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。="" 5、加标准品/样品="" 50l/孔到各自的微孔中，加入酶标记物="" 50l/孔，然后再加入抗体工作液="" 50l/="" 孔，用盖板膜封板，25℃环境中反应="" 30min。="" 6、将孔内液体甩干，用已稀释的洗涤液="" 250l/孔洗板="" 4～5="" 次，每次间隔="" 15～30="" 秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。="" 7、显色：加入底物="" a="" 液="" 50l/孔，再加入底物="" b="" 液="" 50l/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色="" 15min。="" 8、测定：加入终止液="" 50l/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪?="" 450nm="" 处（建议用双波长="" 450/630n="" m="" 检测，5min="" 内读数），测定每孔="" od="" 值。="" 七、结果判定="" 结果判定有两种方法，粗略判定可用第="" 1="" 种方法，定量判定用第="" 2="" 种方法。注意样本吸光度值与其所含氟***尼考量成负相关。="" 1、粗略判定：="" 用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本="" 1="" 的吸光度值为="" 0.3，样本="" 2="" 的吸光度值为="" 1.0，标准液吸光度值分别是：0ppb="" 为2.243；="" 0.1ppb="" 为="" 1.816；0.2ppb="" 为="" 1.415；0.4ppb="" 为0.74；0.8ppb="" 为="" 0.313；1.6ppb="" 为="" 0.155。则样本="" 1="" 的浓度范围是="" 0.8ppb～1.6ppb；样本="" 2="" 的浓度范围是="" 0.2ppb～0.4ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中氟***尼考实际浓度。="" 2、定量分析="" （1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0="" 标准）的吸光度值，再乘以="" 100%，即="" b="" 百分吸光率（%）＝="" ×100%="" b0="" b标准溶液或样本溶液的平均吸光度值="" b00ng/ml="" 标准溶液的平均吸光度值="" （2）标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以氟***尼考标="" 准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中氟***尼考实际浓度。="" 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）="" 八、="" 注意事项="" 1、室温低于="" 25℃或试剂及标本未回到室温（20～="" 25℃）会导致所有标准的="" od="" 值偏低。="" 2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。="" 3、混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。="" 4、反应终止液为="" 2m="" 硫酸，避免接触皮肤。="" 5、不要使用过了有效日期的试剂盒；稀释或搀杂使用会引起灵敏度、od="" 值变化；不要交换使用不同批号的盒中试剂。="" 6、不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。="" 7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。标准品="" 1="" 的吸光度值小于="" 0.5="" 时，表示试剂可能变质。="" 8、该试剂盒最佳反应温度为="" 25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。="" 九、储藏条件和保质期="" 1、储藏条件：试剂盒于="" 2-8℃保存，不要冷冻。="" 2、保="" 质="" 期：该产品有效期为="" 1="" 年，生产日期见包装盒。="" 提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正常有效，不影响实验结果，请放心使用。="">
