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TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒
（AP检测系統）
一、 概述
TUNEL技术是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征，其灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高，因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。本试剂盒适用于组织样本（石蜡或冰冻切片）和细胞样本（细胞爬片）的凋亡原位检测。
产品名称 | 显色系统 | 产品编号 |
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 | AP显色系统 | TUNEL-A1 |
二、试剂盒组成
组分 | 10 assays |
蛋白酶K溶液 | 400μl |
阻断剂 | 400μl |
标记溶液 | 180μl |
脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT） | 20μl |
封闭液 | 400μl |
AP-SP | 400μl |
20XSSC | 10ml |
三、自备试剂及用品
a) 淋洗缓冲液（鼎国生物：PBS***酸盐缓冲液系列BF-0011/0012/0013/0014）
b) 复染剂（鼎国生物：AR-0711/0712/0721/0722/0771/0772）
c) 封片剂（鼎国生物：AR-0811）
d) 孵育盒（鼎国生物：AR-0951/0952）
e) 定时器（鼎国生物：AR-0961/0962）
f) 显微镜
g) BCIP/NBT显色剂（鼎国生物：AR-0631/0632/0633）
h) 核固红（鼎国生物：AR-0771/0772）
四、不同类型标本的处理方法：
实验用玻片：清洗干净，用多聚赖氨酸或APES进行防脱处理。
细胞爬片 | 固定液：4% 多聚甲醛（pH7.4 PBS溶液配制）室温固定30min。 渗透液：0.1% Triton X-100（溶于1XSSC溶液）冰浴2-10min。 |
石蜡组织切片 | 二甲***和梯度乙醇100%、95%、75%、50%，常规脱蜡入水。 10～20ug/ml蛋白 酶K |
冰冻组织切片 | 固定液：4% 多聚甲醛（pH7.4 PBS溶液配制）室温固定30min。 渗透液：0.1% Triton X-100（溶于1XSSC溶液）冰浴2-10min。 |
五、标本处理后的操作
1.
2.
3. 制备TUNEL反应混合液：处理组用TdT酶和标记溶液体积比1：9混合；阴性对照不加酶，以去离子水代替。
4. 除去PBS液，加TUNEL反应混合液于标本上，暗盒中
5. 浸入2XSSC15min终止反应。
6.
7. 滴加AP-SP，
8.
9. BCIP/NBT 染色后，自来水冲洗，核固红复染。
10. 复染后，蒸馏水洗，脱水，透明，封片。
结果观察：显微镜下观察细胞核有蓝紫色或蓝黑色颗粒者为阳性。
六、保存和有效期：
为了您的安全和健康，请穿戴实验服和手套操作！
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