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交联4B琼脂糖微球是在4B琼脂糖微球的基础上通过交联使微球的刚性增强，理化性能提高，有利用于工业生产。该介质用于生物大分子的凝胶层析。
1. 外观
本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
2. 理化指标
| 项 目 | 指 标 | |
| 基 质 | 4% 交联琼脂糖 | |
| 排阻极限 | 60000~20×106 (球蛋白) | |
| 形状 | 球形 | |
| 粒径 | 50~160μm | |
| 最高流速 | 26cm/h* | |
| 耐压 | 0.012 MPa | |
| 耐热 | pH7水中120℃20min | |
| pH适用 | 3~13 (长时间) ，2~14(短时间，在位清洗) | |
| 化学稳定性 | 可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍；可耐有机溶剂，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、丙***、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、***、乙*** | |
*检测条件： 层析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl
3. 包装
产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、保质期、批号、生产日期、生产单位及地址” 等内容。
4. 贮存
产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。
5. 注意事项
本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中
6.运输
运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
7.保质期
暂定5年。
8.应用
本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
下面简要介绍介质的使用过程。
8.1 装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙***-水溶液进行检验。
以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
⑵选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。匀浆作脱气处理。
⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑸打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子，到柱床稳定。
⑹最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。
8.2平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
8.3上样
⑴样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。
⑵介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。
⑶上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。
8.4洗脱
用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
8.5再生
一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
8.6注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
8.6 在位清洗
⑴ 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
⑵ 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。
⑶ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
8.7注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干气泡进入。
8.8 去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：
⑴ 2倍柱体积的70%乙醇
⑵ 2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5
⑶ 1倍柱体积4M尿素
⑷ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制
8.9 消毒
用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。
