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产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 |
| SDS-PAGE Gel Preparation Kit SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | 20328ES50 20328ES72 | 1 kit (30~50 gels) 1 kit (150~250 gels) | 4℃~25℃ 4℃~25℃ |
产品描述
蛋白电泳经常使用聚丙烯酰胺凝胶来实现蛋白分离，此类凝胶一般由浓缩胶和分离胶两部分组成，前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用，后者则是根据凝胶所使用的丙烯酰胺单体和N,N-亚甲基双丙烯酰胺（甲叉丙烯酰胺）交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。
本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶设备和蒸馏水即可配胶，大大简化了制胶过程，货号20328ES50可配制30-50块常规大小的凝胶，20328ES72可配制150~250块常规大小的胶。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | 产品编号/规格 | 保存方式 |
| 20328ES50（30~50 gels） | 20328ES72（150~250 gels） | |||
| 20328-A | 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺，29:1 | 100 mL | 500 mL | 4℃避光 |
| 20328-B | 4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH 8.8 | 70 mL | 350 mL | 4℃ |
| 20328-C | 4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液，pH 6.8 | 30 mL | 90 mL | 4℃ |
| 20328-D | APS 过硫酸铵 | 0.5 g | 2.5 g | 4℃~25℃ |
| 20328-E | TEMED 四甲基二乙胺 | 0.5 mL | 2.5 mL | 4℃~25℃避光 |
运输与保存方法
室温运输。4℃~25℃保存，有效期至少6个月。
注意事项
① 丙烯酰胺溶液和TEMED有毒，请适当防护。
② APS溶液不稳定，当配制成10%溶液后，分装成-20℃冻存。尽量减少室温存放时间，以防失效。若是发现凝胶聚合时间明显延长，需要更换使用其它-20℃冻存或者新鲜配置的10%APS。
③ TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
④ 凝胶凝聚的速度与温度、光照、以及TEMED、APS的用量关系密切。在其他组分用量不变的前提下，可通过适当调节TEMED以及APS的用量，控制现有室温条件下凝胶凝聚的速度。可参考附件的量进行相应的调整。
⑤ 温度较低时，4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液和4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液中的SDS可能析出。此时需水浴温育，并在完全溶解和混匀后使用。
⑥ 凝胶配制过程，特别是液体混匀步骤，需尽量避免气泡的产生。
⑦ 在分离胶上层进行水压时需小心操作，加水速度不宜过快。
⑧ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度【参考附表1】
2 按照附表2配制相应浓度的SDS-PAGE分离胶，制胶程序如下：
2.1 将不同体积的30% Acr-Bis(29:1)、4×分离胶缓冲液和蒸馏水在试管或者小烧杯内混合；
2.2 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免气泡产生；
2.3 在装好的制胶模具中灌入适量分离胶溶液，对于mini胶，分离胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可。然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，从而压平凝胶表面；
2.4 静置30-60 min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面，表面凝胶已聚合；
3 按照附表3配制SDS-PAGE浓缩胶，制胶程序如下：
3.1 去除覆盖在分离胶上的水层。
3.2 将不同体积的30% Acr-Bis(29:1)、4×浓缩胶缓冲液和蒸馏水在试管或者小烧杯内混合；
3.3 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3.4 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
3.5 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3.6 静置10-20 min，等待浓缩胶聚合。
3.7 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
3.8 可用电泳缓冲液吹走孔内残留的一些胶液【可选】，然后进行上样和后续的常规电泳操作。
附表1. 不同浓度SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围
| SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
| 6%凝胶 | 50-150 KD |
| 8%凝胶 | 30-90 KD |
| 10%凝胶 | 20-80 KD |
| 12%凝胶 | 12-60 KD |
| 15%凝胶 | 10-40 KD |
附表2. 不同浓度SDS-PAGE分离胶配制体系
| 分离胶浓度 | 凝胶体积(mL) | 所需各组分体积（单位：mL） | ||||
| 蒸馏水 | 30% Acr-Bis（29:1） | 4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH 8.8 | 10% APS | TEMED | ||
| 6% | 5 | 2.7 | 1.0 | 1.25 | 0.05 | 0.004 |
| 10 | 5.4 | 2.0 | 2.5 | 0.1 | 0.008 | |
| 15 | 8.1 | 3.0 | 3.75 | 0.15 | 0.012 | |
| 20 | 10.8 | 4.0 | 5.0 | 0.2 | 0.016 | |
| 30 | 16.2 | 6.0 | 7.5 | 0.3 | 0.024 | |
| 50 | 27.0 | 10.0 | 12.5 | 0.5 | 0.040 | |
| 8% | 5 | 2.37 | 1.33 | 1.25 | 0.05 | 0.003 |
| 10 | 4.7 | 2.7 | 2.5 | 0.1 | 0.006 | |
| 15 | 7.1 | 4.0 | 3.75 | 0.15 | 0.009 | |
| 20 | 9.5 | 5.3 | 5.0 | 0.2 | 0.012 | |
| 30 | 14.2 | 8.0 | 7.5 | 0.3 | 0.018 | |
| 50 | 23.7 | 13.3 | 12.5 | 0.5 | 0.030 | |
| 10% | 5 | 2.03 | 1.67 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
| 10 | 4.07 | 3.33 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
| 15 | 6.1 | 5.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
| 20 | 8.1 | 6.7 | 5.0 | 0.2 | 0.008 | |
| 30 | 12.2 | 10.0 | 7.5 | 0.3 | 0.012 | |
| 50 | 20.3 | 16.7 | 12.5 | 0.5 | 0.020 | |
| 12% | 5 | 1.7 | 2.0 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
| 10 | 3.4 | 4.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
| 15 | 5.1 | 6.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
| 20 | 6.8 | 8.0 | 5.0 | 0.2 | 0.008 | |
| 30 | 10.2 | 12.0 | 7.5 | 0.3 | 0.012 | |
| 50 | 17.0 | 20.0 | 12.5 | 0.5 | 0.020 | |
| 15% | 5 | 1.2 | 2.5 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
| 10 | 2.4 | 5.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
| 15 | 3.6 | 7.5 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
| 20 | 4.8 | 10.0 | 5.0 | 0.2 | 0.008 | |
| 30 | 7.2 | 15.0 | 7.5 | 0.3 | 0.012 | |
| 50 | 12.0 | 25.0 | 12.5 | 0.5 | 0.020 | |
