HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)_cDNA合成_cDNA及合成纯化_生化试剂库_商城

 
Hifair^TMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis Kit 
  (gDNA digester plus)
  产品信息
       产品名称    产品编号    规格    储存    价格（元）   
     Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)    11121ES60    100T    -20℃    935.00   
                             
 
  产品描述
  Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有基因组DNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase而开发。与Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase相比，Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
    该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6 和oligo (dT)₁₈，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
  产品组分
       编号    组分    产品编号/规格   
     11121ES60 (100 T)   
     11121-A    RNase free ddH₂O    2×1 mL   
     11121-B    5×gDNA digester Buffer    200 μL   
     11121-C    gDNA digester    100 μL   
     11121-D    5×Hifair^TMⅡ Buffer plus    400 μL   
     11121-E    Hifair^TM Ⅱ Enzyme Mix    200 μL   
     11121-F    dNTP（10 mM）    100 μL   
     11121-G    Oligo (dT)₁₈(50 μM)    100 μL   
     11121-H    Random Primers N6 (50 μM)    100 μL   
 
  【注】：1）5×Hifair^TMⅡ Buffer plus包含gDNA digester抑制剂；2）Hifair^TM Ⅱ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。
  运输与保存方法
  干冰运输。-20℃保存。
  注意事项
  1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
  2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制； 
  3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果会与使用Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit（Cat No. 11119ES）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11119ES中的5×Hifair^TMⅡ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。
 
第一链cDNA合成操作步骤
  一、若实验需要去除残留基因组DNA
  1.在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
       组分    使用量   
     RNase free ddH₂O    To 10 μL   
     5×gDNA digester Buffer    2 μL   
     gDNA digester    1 μL   
     模板RNA    Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng   
 
  2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
       组分    使用量   
     RNase free ddH₂O    To 20 μL   
     上一步的反应液    10 μL   
     5×Hifair^TMⅡ Buffer plus    2 μL^※   
     Hifair^TM Ⅱ Enzyme Mix    2 μL   
     dNTP（10 mM）    1 μL   
     Random Primers N6 (50 μM)     1 μL   
     or Oligo (dT)₁₈(50 μM) 
   or Gene Specific Primers (2 μM)    or 1 μL   
     or 1 μL   
 
  ※ 特别提醒：由于上一步反应液gDNA digester buffer的影响，本体系中5×Hifair^TMⅡ Buffer plus只需要加2 μL。
     加入5×Hifair^TMⅡ Buffer plus之后需要先混匀后再加入反转录引物，以完全抑制gDNA digester的活性。
  3. 逆转录程序设置
       温度    时间   
     25℃    5 min   
     42℃    30 min   
     85℃    5 min   
 
  【注】：1）荧光定量实验可以只使用Random Primers N6；也可以1:1与Oligo (dT)₁₈混合使用，效果更好。 
  2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
  3）逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
 
二、若实验无需去除基因组DNA
1. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
     组分    使用量   
     RNase free ddH₂O    To 20 μL   
     模板RNA    Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng   
     5×Hifair^TMⅡ Buffer plus    4 μL^※   
     dNTP（10 mM）    1 μL   
     Oligo (dT)₁₈(50 μM) or Random   Primers N6 (50 μM)    1 μL   
     Hifair^TM Ⅱ Enzyme Mix    2 μL   
 
※ 特别提醒：由于没有gDNA digester buffer的影响，本体系中5×Hifair^TMⅡ Buffer plus需要加4 μL。
为了提高反转录的效率，推荐将RNA、H₂O、反转录引物在65℃保温5 min 后，冰上迅速冷却。然后再加入反转录酶。
2. 逆转录程序设置
     温度    时间   
     25℃    5 min   
     42℃    30-60 min   
     85℃    5 min   
 
【注】：1）荧光定量实验可以只使用Random Primers N6；也可以1:1与Oligo (dT)₁₈混合使用，效果更好。 
2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
3）逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
引物选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)₁₈，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。 
2）原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。 <, /span>
3）Random Primers N6适用性较广，mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板均可用Random Primers N6进行反转录。
4）使用Random primers N6，进行2 kb以下的cDNA合成时，Random primers N6的使用量为 1-2 μL；2 kb 以上的cDNA合成时，Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。
 
 
HB180306

全部商品分类

HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

公司简介

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)	11121ES60	100T	-20℃	935.00

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	11121ES60 (100 T)
11121-A	RNase free ddH₂O	2×1 mL
11121-B	5×gDNA digester Buffer	200 μL
11121-C	gDNA digester	100 μL
11121-D	5×Hifair^TMⅡ Buffer plus	400 μL
11121-E	Hifair^TM Ⅱ Enzyme Mix	200 μL
11121-F	dNTP（10 mM）	100 μL
11121-G	Oligo (dT)₁₈(50 μM)	100 μL
11121-H	Random Primers N6 (50 μM)	100 μL

组分	使用量
RNase free ddH₂O	To 10 μL
5×gDNA digester Buffer	2 μL
gDNA digester	1 μL
模板RNA	Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng