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产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加5mL双蒸水充分溶解。用不完的试剂-20℃保持，禁止反复冻融。
试剂三：液体2mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是植物光呼吸代谢中的关键酶，也是光下合成草酸的关键酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸***肼反应生成乙醛酸***腙，在324nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。操作步骤：
一、酶液提取
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g， 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定操作
测定管
样本（μL）
10
试剂一（μL）
130
试剂二（μL）
40
试剂三（μL）
20
充分混匀，立即于1mL 石英比色皿中测定324nm 处10s和190s 吸光值A1 和A2，△A=A2- A1
三、计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1） 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=392×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO（nmol/min /g）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T= 392×ΔA÷W
ε：乙醛酸***腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.2V 样：反应中样本体积，0.01L；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。
b. 用96孔板测定的计算公式如下：
（1） 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=784×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO（nmol/min /g）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T= 784×ΔA÷W
ε：乙醛酸***腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，0.2V 样：反应中样本体积，0.01L；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。
注意事项：
1. 测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 色素含量较高的样品，可在提取酶时加活性炭吸附。
