羧酸酯酶测定试剂盒

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更新: 2024-11-14
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产品内容:

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂:粉剂×1瓶,4℃保存。用前用20mL无水乙醇充分溶解.  

试剂:粉剂×1瓶,-20℃保存。用前将全部试剂倒入试剂瓶中充分溶解。

试剂:液体30mL×1瓶,4℃保存。

产品说明:

哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物CarE参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机******可结合并且抑制CarE活性。

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固显色;在450nm光吸收增加速率,计算CarE活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液,超声波破碎细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);然后15000rpm4℃,离心30min,取上清置于冰上待检。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000rpm4℃,离心30min,取上清置于冰上待检。

血清:直接测量。

二、测定步骤:

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至450nm,蒸馏水调零。

2、 试剂二和试剂一置于37℃水浴中预热30 min以上。

3、 1mL玻璃比色皿中进行如下操作

加入试剂(μL

空白管

测定管

蒸馏水

15

 

上清液

 

15

试剂二

600

600

试剂一

360

360

迅速混匀后,10s吸光值记为A1空和A137℃水浴反应3min,吹打混匀后立即测定190s吸光值记为A2空,A2。注意:空白管只需做1~2次。计算A空白管=A2-A1空,A测定=A2-A1测。

CarE活性计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:37℃下,每mL反应体系mg组织蛋白每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。

CarE酶活(U/mg prot)= (A测定管-A空白管) ×V反总÷(Cpr×V)÷T

=21.67×(A测定管-A空白管)÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:37下,mL反应体系g组织鲜重每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。

CarE酶活(U/g鲜重)= (A测定管-A空白管) ×V反总 ÷W ÷V样总×V样)÷T

=21.67×(A测定管-A空白管)÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:37下,mL反应体系1万个细菌或细胞每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。

CarE酶活(U/104 cell)= (A测定管-A空白管) ×V反总 ÷200÷V细胞样总×V样)÷T

=0.044×(A测定管-A空白管)

4)按血清计算:

单位的定义:37℃下,每mL反应体系每mL血清每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。

CarE酶活(U/mL)= (A测定管-A空白管) ×V反总÷V÷T

               =21.67×(A测定管-A空白管)

V样总上清液总体积,1mLV样:加入样本体积,0.015 mLT:反应时间,3minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g200:细菌或细胞总数,200V细胞样总:细胞中加入的提取液体积,0.4mLV反总:反应体系总体积,0.975mL

注意事项:

1、动物组织样品一般稀释10倍进行操作测定。

2、当吸光值大于1时,建议将样品稀释后测量。计算公式注意乘以稀释倍数。

3、建议反应时保持37℃的环境,逐一比色。