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产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体0.5mL×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
产品说明：
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的***脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
在碱性环境中，AKP/ALP催化***酸***二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁*化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、 粗酶液提取：
称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃，10000rpm离心10min，取上清液待测。血液可直接用于测定，或者适当稀释后用于测定。
二、 测定操作：
1.分光光度计预热30 min以上，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一置于37℃水浴中预热30 min以上。
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 空白管 | 标准管 |
蒸馏水 | - | - | 20 | - |
2μmol/mL标准品 | - | - | - | 20 |
上清液 | 20 | - | - | - |
试剂一 | 200 | 200 | 200 | 200 |
试剂二 | 200 | 200 | 200 | 200 |
混匀后置于37℃水浴中保温15min | ||||
试剂三 | 600 | 600 | 600 | 600 |
上清液 | - | 20 | - | - |
混匀后于510 nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。 | ||||
三、AKP/ALP活性计算：
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP (U/mg prot)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T
=0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr
2.按样本鲜重计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。
ACP活力(U/g鲜重)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样] ÷(W÷V提取×V样)÷T=0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷W
3.血液中ACP活性计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP活力(U/mL)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样] ÷V样÷T
=0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02mL； V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.02mL；T：反应时间（min），15 min；V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全。
