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产品内容：
试剂一：丙*** 100mL×1 瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存，1mmol/mLH2O2标准液。
产品说明：
H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由 SOD 和 XOD 等催化产生，由 CAT 和 POD 等催 化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或 间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体； 另一方面 H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在 415nm 有特征吸收。
需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、丙***、浓盐 酸、研钵和冰。
操作步骤：
一、H2O2提取：
1、细菌或细胞样品的制备： 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声 波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g4℃离心 10min，取上清， 置冰上待测。
2. 组织样品的制备： 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g4℃离心 10min，取上清，置冰上待 测。
3、血清（浆）样品：按照每 100μL 血清（浆）加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀；8000g4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
注意事项：
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。
二、测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二、三和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
3、如果用 96 孔板将则用丙***将 1mmol/mL 标准液稀释为 2μmol/mL 的标准溶液，用微量玻璃比色 则用丙***将 1mmol/mL 标准液稀释为 1μmol/mL 的标准溶液。
4、在 EP 管中按顺序加入下列试剂 试剂名称（μL）
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 对照管 |
样本 | 250 |
|
|
标准溶液 |
| 250 |
|
试剂一 |
|
| 250 |
试剂二 | 25 | 25 | 25 |
试剂三 | 50 | 50 | 50 |
4000g，常温离心 10min，弃上清，留沉淀 | |||
试剂四 | 250 | 250 | 250 |
加入试剂四溶解沉淀后（可先用丙***清洗 3-5 次来洗去植物色素），室温静置 5min，取 200μL 转移至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 415nm 处吸光值。对照管只要做一次即可。计算∆A 测定=A 测定管-A 对照管，∆A 标准=A 标准管-A 对照管。
三、H2O2含量计算：
1、按照细菌、细胞数量计算： H2O2含量（μmol/104cell）=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷(500×V 样本÷V 提取) =0.004×∆A 测定÷∆A 标准。
2、按组织鲜重计算： H2O2含量（μmol/g 鲜重）=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷(V 样本÷V 提取×W) =2×∆A 测定÷∆A 标准÷W。
3、按照蛋白浓度计算： H2O2含量（μmol/mgprot）＝∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷（Cpr×V 样本） =2×∆A 测定÷∆A 标准÷Cpr。
4、按血清（浆）体积计算： H2O2含量(μmol/mL)=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×10 =20×∆A 测定÷∆A 标准。 500：细胞或细菌总数，万个；C 标液：H2O2标准溶液浓度，2μmol/mL；V 样本：加入的样本 体积，0.25mL；W：组织鲜重，g；V 提取：提取过程中所用体积，1mL；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL； 10：血清稀释倍数，[0.1mL 血清（浆）+0.9mL 试剂一]÷0.1mL 血清（浆）=10。
注意：如果用微量玻璃比色皿（光径 d=1cm）将 1mmol/mL 标准液稀释为 1μmol/mL 的标准溶液。 计算公式亦作改变。
