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X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷
产品信息
产品描述
X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。基于这个特点，当pUC系列载体DNA以lacZ 缺欠细胞作为宿主进行转化时，或M13噬菌体载体DNA进行转染时，如果在培养基中加入X-Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色而方便地挑选择出基因重组体。
常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。
运输与保存方法
冰袋运输。-20 oC避光保存。
产品性质
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
2）含有 X-Gal 的培养基 4℃避光保存，须在1周内使用。
配制储存液
称取200 mg X-Gal于15 mL 离心管，向其中加入10 mL DMF，旋涡震荡使其充分溶解后于-20℃避光保存，正确操作下，有效期可达5-12个月，如小量频繁使用，建议分装成1 mL/管后避光冻存。
蓝白斑筛选
1. X-Gal、IPTG 加入琼脂培养基溶液
1）高压灭菌已加琼脂的培养基，并冷却到50℃左右。
2）每毫升培养基内加入10 μL20 mg/mL X-gal 溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其终浓度达到1 mM）；
3）加入适量抗生素；
4）混匀后按照平板大小倒入适量培养基，待培养基冷却至室温后，接种细菌于37℃过夜培养。
2. X-Gal、IPTG加到琼脂平板表面
1）于无菌超净工作台制备平板（如LB 琼脂板）；
2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均匀地涂布于准备好的平板上；
【注】：平板边缘较难充分涂布均匀，容易产生假阳性，因此，为了得到更好结果，建议后续操作中尽可能在平板中间挑取单克隆。
3）37℃ 孵育直至所有液体被吸收（30 min或更长）。接种细菌于37℃过夜培养。
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