乙醇(化学法)测试盒_细胞生物学检测试剂盒_细胞生物学检测_生化试剂库_商城

 产品说明
含酒精的饮料属于日常饮用的饮料。研究表明，酗酒可能导致各种形式的肝脏疾病和促进死亡率的上升。定量测定酒精(乙醇，C2H5OH)浓度被广泛应用在基础研究，药物开发，临床研究和酒类制造业。简单，直接，自动化测量乙醇浓度方法是非常可取的。博世生物技术公司的乙醇测试盒是基于乙醇脱氢酶催化氧化乙醇，其中形成的NADH耦合到甲臜(MTT)发色体上。产物的颜色强度(565nm)与样品中乙醇的浓度成正比。
适用范围
直接检测：生物样品如血清、血浆、尿液、唾液中的酒精。
药理学: 药物对酒精代谢的影响。
产品特点
灵敏、准确: 检测下限为0.0008 vol % (140 mM or 8 ppm),线性度高达0.1%酒精(96-孔板法)。
使用方便：仅添加单一工作试剂，培养30分钟，不需加热器。
高通量筛选：通过96-孔板高通量的自动化检测，每天可以检测上千份样品。
试剂盒组成(96孔板供100份测试)
   缓冲液：    10  mL          MTT 试剂：1.5 mL          
   酶试剂：   120 mL           终止试剂：  12 mL         
   NAD 试剂: 400 mL          标准液：1.5 mL 1% 乙醇
贮藏条件：室温下储存终止液，其他所有试剂均于-20°C保存。保质期为6个月。
注意事项：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
操作步骤
1. 标准曲线: 取25 mL 1% 标准品加 225 mL蒸馏水制备0.1%的乙醇预混液(Premix)，标准品稀释如下
No Premix + H2O Vol (mL) Ethanol (%)
1      100mL +     0mL 100  0.10
2        60mL +   40mL 100  0.06
3        30mL +   70mL 100  0.03
4          0mL + 100mL 100             0.00
转移10 mL标准品到透明96-孔板的孔中。
样品：加10 mL样品至96孔板的孔中。注意：唾液样品应在测试前用PBS稀释10倍。
2. 反应：在移液前短暂离心酶试剂管，对每一个反应孔，按80 mL 缓冲液, 1 mL酶试剂, 2.5 mL NAD 和14 mL MTT比例制备足量工作试剂。推荐现用现配。
向每个孔内快速添加90 mL工作试剂，轻敲孔板使其混合均匀。室温下培养30分钟。每孔添加100 mL终止试剂，轻敲孔板使其混合。
3. 读取565 nm (520-600nm) 处波长的光密度。
4. 浓度计算：从标准品的测值中减去空白对照的测值(水 #4)，绘制标准曲线(DOD vs 标准乙醇浓度)。测定斜率(Slope)并计算样品中乙醇的浓度,
ODSAMPLE 和 ODBLANK分别是样品和H2O空白对照的OD565nm。n是样品稀释系数(对唾液样品 n = 10)。
 注意: 如果样品酒精浓度高于0.1%，用蒸馏水稀释并再次检测。结果乘以稀释系数。
单位换算：1 vol % 乙醇相当于 170 mM or 785 mg/dL 
实验必需品(未提供)
移液器、透明平底96孔板、吸光度分析仪。
总论
1. 该测试是基于酶动力学反应，加入工作试剂应迅速并要短暂混合。推荐使用多通道移液器。
2. 样品制备过程中应避免使用下列干扰物质：抗坏血酸,SDS (>0.2%),叠氮化钠,NP-40(>1%)和Tween-20(>1%)。
96孔板标准曲线
参考文献
1. Dembele, K. et al (2008). Effects of ethanol on pancreatic beta-cell death: interaction with glucose and fatty acids. Cell Biol Toxicol. 25(2):141-52.
2. Ou XM et al (2010). A novel role for glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and monoamine oxidase B cascade in ethanol-induced cellular damage. Biol Psychiatry 67(9):855-63.
3. Tapia H and Morano KA (2010). Hsp90 nuclear accumulation in quiescence is linked to chaperone function and spore development in yeast. Mol Biol Cell. 21(1):63-72.
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