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 产品名称 : L-乳酸测试盒 | EnzyChrom™ L-Lactate Assay Kit
 
 
分类名称 : 血液尿液化学,代谢产物分析 
 
产品介绍 : 测定方法   比色法（565nm）定量测定L -乳酸的浓度。
 
产品说明
乳酸是在缺氧或厌氧条件下由乳酸脱氢酶(LDH)催化生成。因此乳酸浓度的监测是组织内氧需求与利用平衡的良好指标。同时对细胞和动物生理学研究也很重要。
简单，直接和自动化的乳酸浓度检测方法是非常可取的。博世生物技术提供的L-乳酸测试盒是基于乳酸脱氢酶催化氧化乳酸，其中形成的NADH耦合到甲臜(MTT)发色体上。产物的颜色强度(565nm)与样品中乳酸的浓度成正比。
适用范围
直接检测：样品如血清、血浆、细胞培养物中的乳酸浓度。
产品特点
敏感、准确: 96-孔板检测范围为0.05～2 mM乳酸，对于含有酚红的细胞培养物样品，检测范围为0.1 mM～1 mM 乳酸。
方便: 仅需添加单一工作试剂并在开始和20分钟时读取光密度。室温下检测，无须37℃加热器。高通量: 通过96-孔板高通量的自动化检测，每天可以检测上千份样品。 
试剂盒组成(96孔板供100份检测)
   缓冲液：        6 mL         NAD试剂：   1 mL
   酶试剂A：120 mL          MTT  试剂：1.5 mL
   酶试剂B：120 mL          标准液：1 mL 20 mM L-乳酸
   
贮藏条件：所有试剂均于-20°C保存。保质期为6个月。
注意事项：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
操作步骤
注意：该测试是基于酶动力学反应，加入工作试剂应迅速并要短暂混合。推荐使用多通道移液器。
1. 标准曲线：将100mL 20 mM标准品与900 mL蒸馏水混合制备1000 mL 2 mM的L-乳酸预混液。对于含有酚红的细胞培养物样品，将50 mL 20 mM 标准品与无血清的950 mL培养基混合制备1000 mL 1 mM 乳酸预混液。稀释标准品如下。
No Premix + H2O or Medium Vol (mL) L-Lactate (mM)
1      100mL +     0mL 100 2.0 or 1.0
2        80mL +   20mL 100 1.6 or 0.8
3        60mL +   40mL 100 1.2 or 0.6
4        40mL +   60mL 100 0.8 or 0.4
5        30mL +   70mL 100 0.6 or 0.3
6        20mL +   80mL 100 0.4 or 0.2
7        10mL +   90mL 100 0.2 or 0.1
8          0mL + 100mL 100 0
转移20 mL标准品至透明平底96-孔板的孔内。
样品: 添加20 mL样品到不同的孔内。对于潜在含有活性酶的样品(如血清，血浆，组织提取物)，应设置两组不同反应：一组加入酶试剂A而另一组作为对照不加酶试剂A。血清和血 浆在检测前应该用蒸馏水至少稀释2倍。
2. 试剂制备：移液前短暂离心酶试剂管。每个反应孔按60 mL 缓冲液, 1 mL酶试剂A, 1 mL酶试剂B, 8 mL NAD 和 14 mL MTT的比例配置足量工作试剂。推荐现用现配。对无, 酶试剂A的样品对照组，按60 mL缓冲液, 1 mL酶试剂B, 8 mL NAD 和 14 mL MTT配置工作试剂。
3. 反应：迅速向每孔添加80 mL工作试剂，轻敲孔板使其混合。
4. 读取时间为零时的光密度(OD0) (520-600nm)，及在20分钟培养后的光密度(OD20)。
5. 计算：从标准品和样品的测值OD20中减去OD0。对照标准曲线用DOD值测定样品中乳酸的浓度。对于需无酶试剂A对照的样品，需从DODSample减去DODNoEnz，用DDOD值测定样品L-乳酸浓度。
注意：如果样品的OD值比2 mM L-乳酸标准品OD值高，需用水稀释样品并再次测测，结果乘以稀释系数。
实验必需品(未提供)
移液器(多通道)、透明底96-孔板、吸光度分析仪。
总则
样品制备过程中应避免使用下列干扰物质：抗坏血酸,SDS (>0.2%),叠氮化钠,NP-40(>1%)和Tween-20(>1%)。
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