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Real Time PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光物质，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。因其无需电泳，且具有快速性及定量性而倍受青睐。本公司承接利用Real Time PCR法进行课题研究的技术服务，可以提供从引物设计合成开始，至Real Time PCR反应检测的一条龙技术服务，欢迎惠顾！

■ 服务项目

◇ 定性分析 (SNP分型解析等) ◇ 绝对定量 ◇ 相对定量 (mRNA表达量分析)

◇ DNA Microarray数据确认 ◇ RNAi效果确认 (siRNA的筛选)

■ 检测方法

SYBR^® Green I 嵌合荧光法，双标记荧光探针法，Cycling探针法。

■ Real Time PCR装置

使用本公司Thermal Cycler Dice™ Real Time System和美国ABI公司的ABI 7500 Fast为主的多种Real Time PCR装置。

服务项目说明

■ 定性分析

PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测，可以通过Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。

■ 绝对定量

绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量 (起始拷贝数) 分析。

■ 相对定量 (mRNA表达量分析)

基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。

服务要求

◇ 如果您需要进行此项服务，请填写“TaKaRa Real Time PCR 检测技术服务委托书”。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。 ◇ 进行mRNA表达量分析时，请寄送足量的并且保证纯度的Total RNA (浓度在500 ng/μl以上，体积在 20 μl以上)。如果目的基因表达量低时，应尽量提供更高浓度的Total RNA。 ◇ 如果提供的材料为细胞或组织，DNA、RNA的提取费用另收。同时应保证材料新鲜，动物细胞数为10⁶以上，动物组织为100 mg以上。

服务项目示例-以相对定量为例

■ 引物设计合成

具体情况请参见“TaKaRa Real Time PCR用引物设计合成服务”部分内容。

■ 制作标准曲线

使用设计合成的引物，以客户提供的Total RNA样品为模板，进行Real Time PCR反应，确认引物模板的反应性能。然后将模板进行5个浓度梯度稀释，制作标准曲线，以供进一步定量分析使用。

■ Real Time PCR反应及定量分析

对客户提供的RNA Sample，进行Real Time RT-PCR反应，并进行定量分析。用相对定量方法进行定量分析时，要对管家基因等参比基因进行同样操作，用所得到的值进行RNA量的校正，最后求得目的基因的相对表达量。

价格 · 交货期

服务项目		价格			交货期*
定性分析	DNA 样品	基础费用		1,500 元	3 周
		样品检测费用	1～5 个检测样品	250 元/样品
			6～20 个检测样品	200 元/样品
			21～50 个检测样品	150 元/样品
			50 个以上检测样品	询价
	RNA 样品	基础费用		2,000 元
		样品检测费用	1～5 个检测样品	300 元/样品
			6～20 个检测样品	250 元/样品
			21～50 个检测样品	200 元/样品
			50 个以上检测样品	询价
SNP分型解析	DNA 样品	基础费用 (含两条探针合成费)		4,000 元 /SNP位点	3～4 周
		样品检测费用	1～5 个检测样品	300 元/样品/位点
			6～20 个检测样品	250 元/样品/位点
			21～50 个检测样品	200 元/样品/位点
			50 个以上检测样品	询价
绝对定量	DNA 样品	基础费用		3,000 元	3 ～4周
		样品检测费用	1～5 个检测样品	300 元/样品
			6～20 个检测样品	250 元/样品
			21～50 个检测样品	200 元/样品
			50 个以上检测样品	询价
	RNA 样品	基础费用		4,000 元
		样品检测费用	1～5 个检测样品	400 元/样品
			6～20 个检测样品	300 元/样品
			21～50 个检测样品	200 元/样品
			50 个以上检测样品	询价
相对定量	RNA 样品	基础费用		3,000 元/基因	3 ～4周
		样品检测费用	1～5 个检测样品	500 元/样品/基因
			6～20 个检测样品	400 元/样品/基因
			21～50 个检测样品	300 元/样品/基因
			50 个以上检测样品	询价

■ 报价说明

◇ SNP分型解析以外的技术服务报价是针对采用SYBR Green I 嵌合荧光法的报价。如果是采用双标记荧光探针或Cycling探针方法时，相应的探针合成费用另计，价格请具体垂询! ◇ 以上技术服务报价是以提纯的核酸 (即：DNA或RNA) 为起始材料设定的，如果需要进行核酸纯化时，费用另计。 ◇ 相对定量检测时，若客户要求构建RNA标准品或因客户提供的Total RNA不能作为标准品时，构建 RNA标准品的费用另计。价格请具体垂询！ ◇ 相对表达量分析方法可采用△△Ct法或双标准曲线法，客户可以根据需求自行选择。 ◇ 如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败，使实验提前终止，已启动的实验项目仍正常收费。＊一般情况下，检测样品数为20个以下时，交货期为3周，检测样品数为20个以上时，具体交货期请垂询！若遇特殊原因，如因实验材料原因，Total RNA需要重新提取；基因表达量较低，需要构建标准品等情况，交货期会有所延长。

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