莱拓福克隆一号是一种全新的,颠覆传统理念与方法的DNA克隆,基因融合,与靶向突变的分子生物学技术;提供最快,最方便和最有效的基因克隆,基因融合,与靶向性点突变的试剂与方法。产品名称:莱拓福克隆一号产品类型:生物试剂性 状: Liquid规 格:10 Reaction,20 Reaction和50 Reactionl贮 藏:本试剂保存于-20℃产品用途:科研实验,用于DNA克隆,基因融合,与靶向突变。
技术咨询:李经理15073481544
销售咨询:吴经理18673139001
操作步骤:
1.用PCR制备插入片段,用酶切线性化载体,纯化
2.制备反应体系(1.5ml 离心管): 克隆一号: 1 ul 载体 + 插入片段 + 水: 4 ul
3.室温(20-25度)孵育 5 分钟
4.冰上孵育10 分钟
5.加入感受态细菌50-100ul
6.冰上孵育30 分钟
7.热休克 90 秒
8.冰上速冻30秒
9.加 LB 培养基 0.8 ml
10.震动培养1小时
11.铺板,37度培养过夜
12.或者: 可冰上孵育5分钟(第六步),即刻铺板。若如此,以抑菌霉素(如卡那霉素)为佳。若用氨苄霉素,宜适量降低浓度。优点:
•高效,98-100% 阳性克隆
•快速,容易操作,不需要任何经验
•无内切酶位点限制
•可进行多片段、大片段DNA克隆
•特别适用于位点特异性靶向突变
•也特别适用于构建融合蛋白表达载体
•克隆片段的方向可控,可选择性进行正向或反相克隆。