阶段一（客户选择）标准抗原的合成或天然抗原的分离纯化。阶段二通过免疫接种程序，免疫5只 Balb/c小鼠。用ELISA测定血清滴度。大约需要3-4mg 蛋白抗原或2mg偶联多肽抗原和0.5mg未偶联多肽。当血清中抗体滴度达到合适值，利用小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，以生成需要的杂交瘤,对杂交瘤细胞进行ELISA，从中筛选出阳性的母克隆细胞株。阶段三对ELISA检测阳性的杂交瘤做有限稀释，对亚克隆细胞做ELISA检测，筛选出10个符合做直接ELISA检测的单克隆抗体杂交瘤细胞株。对筛选出的杂交瘤中的单克隆抗体进行亚类鉴定。阶段四从母克隆杂交瘤中筛选出阳性的细胞株，做第二次有限稀释，从中再筛选出各项检测结果一致、可靠的亚克隆细胞株。如检测结果一致性不高，继续做第三次有限稀释。阶段五通过腹水或高密度无血清培养大量生产单克隆抗体。阶段六从腹水或细胞培养上清中纯化抗体，测定纯化抗体效价和亲和力检测。阶段七对纯化抗体做生物素标记，然后对标记抗体进行分子筛层析纯化。阶段八用棋盘式夹心ELISA筛选适合做夹心ELISA的单克隆抗体对。用一未标记抗体包被多孔板，然后加入标准抗原，再加入被生物素标记的同种或不同中抗体，继续ELISA检测操作。从中筛选出对同种标记抗体加入后OD值不升高，而加入不同种标记抗体后OD值明显升高的抗体。阶段九（客户选择）用选定的单克隆抗体对做棋盘式ELISA实验，优化抗体的各自用量。用标准品做ELISA检测曲线，与现有ELISA试剂盒做对照。检测使用不同单克隆抗体对的ELISA检测抗原的灵敏度。阶段十（客户选择）用已有ELISA诊断试剂盒做对照，将含抗原或不含抗原的测试血清或其它供检测生物样品加入到一抗包被的多孔板种，检测实验建立的用于ELISA的单克隆抗体对与已有的ELISA试剂盒检测结果是否存在一致性。并检测对同一样品检测结果的重复性和对抗原的回收率。选择各项检测结果最好的单克隆抗体对做ELISA试剂盒。
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