大肠杆菌表达重组蛋白定制服务1 目的基因的扩增RT-PCR获得基因所在组织的cDNA或构建cDNA文库设计引物，PCR扩增目的基因2 克隆载体与表达载体构建： 将目的基因构建到一系列表达质粒中 表达质粒中的目的基因的DNA测序3 评估和优化 将重组质粒DNA导入到感受态细菌中 诱导目的基因表达并选择高表达的转化细胞通过SDS-PAGE和Western blotting来评定小量表达的结果估计目的蛋白表达量，制定纯化策略4 大量表达和纯化：（纯度>85%）高表达细胞的大规模培养细胞收集并进行裂解亲和层析纯化细菌裂解液进一步的纯化目的蛋白通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白5 特殊纯化处理：（纯度>90%） 切除纯化标志，进一步纯化后进行SDS-PAGE分析 亲和层析除去融合标记，并对收集溶液进行透析 凝胶过滤去除蛋白溶液中的污染物 通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白6 高纯度纯化：（纯度>95%）AKTA层析仪分子筛层析目的蛋白目的蛋白的降解与变性控制质谱分析蛋白分子量与蛋白纯度7 超高纯度纯化：（纯度>98%）8 去内毒素处理9 蛋白活性检测：酶活性检测、细胞因子活性检测、结构蛋白抗体结合活性检测10 蛋白冷冻干燥
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