酵母表达重组蛋白定制服务1 目的基因的扩增RT-PCR获得基因所在组织的cDNA或构建cDNA文库设计引物，PCR扩增目的基因2 克隆载体与表达载体构建： 将目的基因构建到一系列表达质粒中 构建到表达质粒中的目的基因的DNA测序3 整合外源基因细胞株的鉴定 将重组质粒DNA导入到感受态酵母细胞 用His-平板筛选转化酵母细胞 用抗生素标记筛选整合外源基因的酵母细胞用PCR鉴定外源基因在酵母DNA中的重组4 小量表达并优化表达条件对几个阳性细胞株进行小量诱导表达对蛋白表达条件和蛋白纯化方法进行优化估计目的蛋白表达量，制定纯化策略5 大量表达和纯化：（纯度>85%） 高表达细胞的大规模培养 细胞收集并进行裂解活收集细胞培养液 亲和层析纯化并进一步的纯化蛋白溶液中的污染物 通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白6 特殊纯化处理：（纯度>90%） 切除纯化标志，进一步纯化后进行SDS-PAGE分析 亲和层析除去融合标记，并对收集溶液进行透析 凝胶过滤去除蛋白溶液中的污染物 通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白7 高纯度纯化：（纯度>95%）AKTA层析仪分子筛层析目的蛋白目的蛋白的降解与变性控制质谱分析蛋白分子量与蛋白纯度8 超高纯度纯化：（纯度>98%）9 蛋白活性检测：酶活性检测、细胞因子活性检测、结构蛋白抗体结合活性检测10 蛋白冷冻干燥附加项目:高密度发酵转基因酵母细胞大规模纯化重组蛋白
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