点击图片查看原图
TRF（Time Resolved Fluorescence）技术
TRF技术利用了镧系元素螯合物所发出的荧光衰减时间很长的特点，其灵敏度高，动态范围广。下表列出了镧系元素铕的螯合物和常用的荧光素之间的比较。
| 铕螯合物（Eu-chelate） | 荧光素 |
激发光峰值(nm) | 340 | 490 |
发射光峰值(nm) | 613 | 515 |
Strokes’ shift (nm) | 273 | 25 |
衰减时间(ns) | 730000 | 3 |
发射光波长宽度 | 窄 | 宽 |
背景干扰 | 低 | 高 |
自淬灭 | 无 | 强 |
重复测量次数 | 高 | 低 |
多标记应用 | 好 | 有限 |
从上表中可以看出TRF技术的几大特点：
l
镧系元素的宽Stroke’ s shift |
镧系螯合物激发后的衰减曲线 |
普通荧光激发后的衰减曲线 |
检测的时间窗口 |
镧系元素的超长衰减时间 |
l 发射光持续时间长，最高可达传统荧光素的数万倍，从而可以延迟检测，扣除背景荧光。
l 高灵敏度，因为扣除了背景荧光，所以可以得到比常规荧光高得多的灵敏度。
l 多重标记，镧系元素中的铕，铽，镝和钐的发射光波长差异明显，最大可以进行四重标记。
根据时间分辨荧光的原理衍生出的相关技术，包括DELFIA、LANCE和TruPoint等。
