酵母双杂交文库构建技术服务介绍 酵母双杂交技术产生以来，主要应用在以下几个方向：1、检验一对功能已知蛋白间的相互作用。2、 研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。3、 用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库，以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。4、 分析新基因的生物学功能，即以功能未知的新基因去筛选文库。通常依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到"诱饵"载体，并和GAL4蛋白的DNA结合域(DBD)表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到"猎物"载体，同GAL4的转录激活域(AD)表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时，AD和DBD间距离被拉近，从而激活报告基因的表达。 本服务项目使用infusion重组系统进行重组，使用专利的cDNA合成方法进行cDNA的合成。 实验步骤 1.1.RNA提取 1.2.mRNA分离 1.3.cDNA合成（使用酶促法直接合成，不经过PCR扩增过程，比SMART方法质量大大提高） 1.4.cDNA长度分级 1.5.分级后的cDNA与酵母双杂载体(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等载体，或者客户指定载体)进行infusion重组。 1.6.重组后产物电转化感受态细胞 1.7.文库铺板检测与菌液保存 1.8.文库质粒提取 产品内容 我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），文库甘油菌，随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告，酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。 质量标准 3.1 文库库容量：大于1*10^7CFU。 3.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。 3.3 阳性率：大于95%。 服务时间 20个工作日内 备注1：该酵母文库可以选择增加均一化处理步骤，我们使用DSN法均一化方法，可以构建出高质量的均一化酵母杂交文库，可以大大减少后续酵母筛选的工作量和筛选效率等。 提供的产品 ♦ 详细的实验报告 ♦ 酵母双杂交（酵母单杂交）文库质粒、菌液 备注2：如果客户需要转化酵母，我们可提供100管酵母甘油菌工作液及母液（同clontech）。 服务周期 获得合格的总RNA后25工作日，如需转化酵母延长15个工作日。 材料要求 客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库，由客户提供组织、细胞或总RNA给我们即可： 细胞样本：细胞数量大于1*10^7 动物样本：大于1g 物样本：大于2g 总RNA：大于200ug
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