合肥基赛生物供应Fermentas EcoRI ER0271_酶标仪_测读系统_仪器设备库_商城

货号：	ER0271
供应商：	合肥基赛生物科技有限公司
保存条件：	-20度
规格：	5000 units

Product information
5'...G^A A T T C...3'
3'...C T T A A^G...5'

Reaction conditions

Recommended buffer for 100% activity	Optimal temperature	Enzyme activity in Fermentasbuffers, %						Tango buffer for double digestion
Recommended buffer for 100% activity	Optimal temperature	B(blue) 1×	G(green) 1×	O(orange)1×	R (red) 1×	Tango(yellow) 1×/2×		Tango buffer for double digestion
EcoRI	37°C	0-20	NR	100	100*	NR	100	2×

* 星活性比5倍过量酶切(5 units×1 hour)还强。

100%酶活性的反应条件

1× 缓冲液EcoRI：
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2, 100 mM NaCl, 0.02% Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液

EcoRI保存在：
10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 300 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 0.15% Triton X-100和50%(v/v)甘油。
连接和重新酶切

50倍EcoRI过量酶切后，超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。
琼脂糖包埋DNA酶切

至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。
注：低盐、过量酶切、pH>8.0或用Mn²⁺替代Mg²⁺都会导致星活性。
兼容性末端

XapI, MunI, TasI。
甲基化影响

        Dam: 无重叠 – 不影响。
        Dcm: 无重叠 – 不影响。
        CpG: 可能重叠 – 部分影响。
        EcoKI: 无重叠 – 不影响。
        EcoBI: 可能重叠 – 不影响。

Methylation type	Sequence	Cleavage effect
CpG	5'...m5C GAATTm5C G...3' 3'... Gm5CTTAA Gm5C...5'	部分影响
EcoBI (TGA(N)8TGCT)	5'...TGm6AATTC(N)4TGCT...3' 3'...ACTTAAG(N)4m6ACGA...5'	不阻止酶切

Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments

bp from the recognition site tofragment end
1	2	3	4	5
50-100

Number of recognition sites in DNA molecules

Lambda	ΦX174	M13mp18/19	pBR322	puc18/19	pUC57
5	0	1	1	1	1
pTZ19R/U	pTZ57R	pBluescriptIIKS(-/+)	pBluescriptIISK(-/+)	pACYC177	pACYC184
1	1	1	1	0	1

Protocols & recommendations
DNA酶切
我们推荐在20 μl反应体系中，用2-10倍过量的限制酶切割0.2-1.5 μg DNA。标准的限制酶切操作方法如下：

1. 按先后顺序添加以下组分：

水，无核酸酶	16-16.5 µl
10×缓冲液	2 µl
底物 DNA	1 µl (~1 µg)
限制酶	0.5-1 µl (5-10 u)
总体积	20 µl

2. 轻轻混匀后短暂离心。

3. 优化反应温度下孵育1-16小时。

备注

a. 酶切反应体系可相应地放大或缩小。

b. 有些限制酶需要添加剂才能达到所描述的活性。在这种情况下，加入添加剂并相应调整水的体积。

PCR产物酶切
PCR产物酶切最方便的途径是在PCR完成后直接将限制酶加入到PCR反应管中。Fermentas公司的大多数限制酶在Fermentas公司的PCR缓冲液中有活性。
然而，在PCR扩增反应液中，PCR产物酶切效率往往不高。因此，酶切时加入的PCR扩增反应液体积不要超过酶切反应总体积的1/3，否则会抑制酶切效率。

1.按先后顺序添加以下组分： PCR 扩增产物 10 µl (~0.1-0.5 µg of DNA)