凋亡因子Caspase-3/8/9活性检测实验-技术服务

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更新: 2021-05-29
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 长沙南科生物技术有限公司是一家专业提供医学、生物学实验技术服务和技术解决方案的生物科技公司,能提供整套实验技术服务,从协商设计实验、代做实验、写作和代发SCI论文到课题完成。
专业提供生物医药实验技术服务
长沙南科生物
http://www.nkbio.cn
业务经理陆勇:18229848048/14726920250
技术服务项目:病理形态学、细胞生物学、分子生物学、免疫与生化、组织与基因芯片、动物实验等.

       长沙南科生物技术有限公司是一家专业提供医学、生物学实验技术服务和技术解决方案的生物科技公司,公司拥有完善的病理组织、分子生物、免疫与生化、细胞培养、病毒学、动物及裸鼠实验室,开展质粒构建、蛋白表达、抗体制作、医学及生物实验技术服务,已成功的为湘雅医学院、同济医学院、北京儿童医院、解放军301309医院、华中农大、上海华山医院、上海瑞金医院、温州医学院、武大医学院、广东医学院、第三军医、第四军医、湖南省人医、湖南省肿瘤医院、湖南农大、湖南中医大、湖北中医大等单位提供了优质的实验技术服务以及相关产品和试剂。

南科生物面对医学院及其附属医院、医药科研院所、设有生物专业高校提供单项和整体课题实验技术服务,对于握有科研课题但工作繁忙而无暇分身的临床医生而言,只需要您将课题交付我们,剩下的工作由南科生物完成,我们可以为您节约大量宝贵的时间和精力;对于面临毕业压力的广大硕博士而言,我们乐于一起探讨课题方案的合理性并给出建议,最大程度上优化实验方案和节约资金;对于课题也许您还只有一个设想,南科生物只需要您的课题设想或目标,我们愿意和您一起讨论并确定合理的课题方案并付诸实施,直至论文交付和顺利毕业。

南科生物所追求的目标不仅仅是科研课题实施的过程,更多的时候我们关注实施前后的各个环节,客户满意将是南科生物最大动力。

南科生物力求建立诚信、优质、高效的服务形象,并以此确定南科在医学、生物学实验技术外包领域的领先地位。

南科生物提供组织蜡块包埋、组织切片、HE染色、病理特殊染色、细胞培养、细胞爬片、免疫组织化学IHC,免疫细胞化学ICC、免疫荧光IF、激光共聚焦照相、细胞凋亡TUNEL染色等形态学方面的实验技术服务,包括实验材料提供(组织、细胞、抗体等)、课题设计与实验操作、图片采集与结果评价等方面的技术服务。  南科生物多年以来已建立一批人体各器官正常组织、肿瘤组织与肿瘤旁旁组织的蜡块库和一批常用人、大鼠、小鼠细胞株库存以供选择使用。客户可选择由南科生物提供实验材料或者自己提供材料,我们负责完成组织包埋处理、石蜡切片、细胞培养、细胞爬片、染色、图片采集、数据测定等全套技术服务。

凋亡因子Caspase-3/8/9检测:
Caspase3

Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也称CPP32,是细胞凋亡过程中的一个关键酶,可以剪切procaspase 2、6、7和9,并可以直接特异性剪切许多caspase底物,包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase),ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease),gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用,包括染色质固缩,DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。
检测原理基于casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。参照黄色产物pNA制作的标准曲线,可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。
Caspase-8
Caspase 8通常以酶原的形式存在,在细胞凋亡的信号转导过程中被激活,Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase,在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡过程中caspase 8被激活,形成一个由p18和p10组成的二聚体,进一步激活下游的caspase 4,caspase 6,caspase 9和caspase 10。 
本方法基于Caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线,可以计算样品的Caspase 8酶活性。
Caspase-9
Caspase 9也称ICE-LAP6
或Mch6,是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase。线粒体释放细胞色素c以后,caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物,同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋亡的最关键酶caspase 3,从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。
本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线,可以计算样品的Caspase 9酶活性。

凋亡因子Caspase-3/8/9检测样本准备:
1)细胞样品:取1×107个细胞(约1个T25的培养瓶细胞量),600g 4℃离心5分钟收集细胞,小心吸除上清,PBS洗涤一次。吸取上清后,每管细胞样品加入100ul裂解液重悬沉淀,冰浴裂解15分钟。4℃ 16,000g离心10-15分钟,把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70℃保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度,尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml。
2)组织样品:约每10mg组织加入100ul裂解液,在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1.5ml离心管中,冰浴再裂解5分钟。4℃ 16,000g离心10-15分钟,把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70℃保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度,尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml。

收费:80元/每样品(10个样本起做)报价不含细胞培养。
1)试剂由实验室免费提供;
2)客户提供检测样品和实验设计资料; 
3)三次重复检测优惠。


专业提供生物医药实验技术服务
长沙南科生物
http://www.nkbio.cn
业务经理陆勇:18229848048/14726920250
技术服务项目:病理形态学、细胞生物学、分子生物学、免疫与生化、组织与基因芯片、动物实验等

免疫学与生化实验 客户注意事项

1.客户告知实验分组、编号及背景设计资料,有具体要求请事先说明;
2.抗体:事先咨询长沙南科生物,明确抗体种属以及是否有该抗体可使用,如有一抗使用费300元每指标,如无可由双方协商而定,客户自己购买提供或我公司代购;
3.标本收集与保存:
组织样品  新鲜组织放入液氮或-70度保存,组织不少于100mg(约绿豆大小);
培养细胞  通过细胞计数取不少于2000000个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-70℃,避免反复冻融);
血液细胞标本  以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-70℃可长期保存,避免反复冻融)
血清或细胞培养液标本  离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(以上4℃可保存15-20天,-70℃可长期保存,避免反复冻融)
4.样本运输:可选以下任何的一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输;
细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶(密封保证不污染,培养液不漏出,细胞不要长得太满,50%左右,灌满培养液);
血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保证液体不漏出,视路途远近2-3天可到达)。