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MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的Formazan，用酶联免疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
技术步骤
1. 接种细胞：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000~10000孔，边缘孔用无菌PBS填充。
2. 细胞培养：5% CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）。
3. 药物处理：加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5~7个梯度，每孔100ul，设3~5个复孔。
4. 呈色：5% CO2，37℃孵育16~48小时，倒置显微镜下观察。每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5% MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2~3遍后，再加入含MTT的培养液。
5. 溶解： 终止培养，小心吸去孔内培养液。对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
6. 比色：在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制细胞生长曲线。同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。
应用实例
通过杭州市西湖区市场监督管理局(之江工商分局)认证 
