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提供商：

派森诺生物

小RNA测序

简介：Small RNA是一类重要的体内调节分子，长度在18-30nt之间，主要包括miRNA、piRNA和siRNA。它的功能主要是诱导基因沉默，参与基因转录后调控，从而调节细胞生长、分化，以及个体发育、生殖等重要生物学过程。高通量测序技术可以对样本中所有small RNA家族进行测序和表达定量，从而解析miRNA、siRNA、piRNA和其它非编码RNA以及相应靶序列。

一、技术路线

推荐平台：Illumina HiSeq 2000和Illumina MiSeq

对于真核生物的小RNA测序，派森诺生物利用Illumina HiSeq 2000和Illumina MiSeq两个测序平台为您提供服务。其中Illumina HiSeq 2000平台追求的是最高的通量，数据成本相对较低，但所需实验周期较长； Illumina MiSeq平台是小型化测序仪的代表，追求的是高效率，可以为您节省项目时间，但是相对成本较高。

二、信息分析

1、原始数据整理、过滤及质量评估

2、小RNA的注释

3、microRNA分析

3.1 microRNA的表达量分析

3.2 microRNA的表达量差异分析

3.3 microRNA表达模式聚类分析

3.4 microRNA保守性分析

3.5 miRNA靶基因预测

3.6 差异miRNA靶基因富集分析(针对模式生物)

3.7 新microRNA预测

4、根据客户需求进行个性化分析

三、样品要求

1、总RNA：浓度≥200 ng/μl，总量≥3 μg；OD260/280介于1.8-2.2之间，OD260/230值应≥2.0。电泳检测28S:18S至少大于1.5；并确保RNA无降解，无污染。提取总RNA时，请避免使用过柱法和LiCl沉淀法，以避免Small RNA的丢失。

2、组织样品：动物、植物、微生物总量大于500 mg的新鲜样品(植物材料应尽量选取幼嫩部位)。采样后将样品立即用RNAlater和液氮速冻，保存于-80℃(保存期不超过一个月)，送样时使用干冰运输(不超过72 h)；提取RNA后经变性电泳，保证各RNA条带清晰、比例适中、完整性好、无降解。特别要求样品分成3份，方便后续提取，避免同一份样品反复冻融造成样品降解。

3、细胞样品：先使用TRIzol试剂进行处理，每0.25 mL样品(5-10×106个细胞)加入0.75 mL TRIzol试剂(可参考TRIzol试剂说明书)，于-80℃保存，并提供2-3份该样品。原则上不接收未经TRIzol处理的细胞样品。

4、Small RNA：要求从1-10 μg的总RNA中纯化，一般不推荐客户提供。

5、样品保存期间切忌反复冻融。

6、送样管务必标清样品编号，管口使用Parafilm膜密封。

四、派森诺优势

★ 拥有标准化操作实验室和高通量测序技术平台，实验周期短，质量可靠。

★ 技术人员经验丰富，可以根据合作伙伴要求提供实验方案、解决实验问题、分析实验结果。

★ 拥有适合小RNA测序的Illumina HiSeq 2000和Illumina MiSeq高通量测序平台。

★ 拥有专业的生物信息团队和完整的生物信息分析服务体系，除提供标准化生物信息服务外，还可以为合作伙伴提供个性化的生物信息分析服务。

★ 拥有标准的、实时更新的项目进展流程，有助于合作伙伴及时了解项目进展最新情况。

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