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服务名称：

RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术服务

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服务概述

cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE）是一种基于RT-PCR，在仅知目标基因部分表达片段的基础上，从低丰度的转录本中快速扩增其cDNA的5’和3’末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。RACE实验成功的关键在于高质量与完整性好的RNA以及特异性强的引物。我们采用国内目前应用最广的SMARTer^TM RACE cDNA Amplification Kit（CLONTECH）进行cDNA的5’和3’末端片段克隆。最终，从2个有相互重叠序列的5’和3’-RACE产物中获得全长cDNA；或者通过分析RACE产物的5’和3’端序列，合成相应引物扩增出全长cDNA。
由于mRNA存在个体和组织差异或基因的序列特殊，RACE的PCR产物测序有时会有个别碱基是套峰或测不通的情况，对未测通部分可继续进行克隆测序，最终提供两个质粒的测序结果，碱基的准确性由您自行判断。

样品要求

样品种类	样品要求
动物、植物、微生物组织	提取Total RNA的材料要新鲜，请您采样后立即存于液氮或-80℃后保存不超过一个星期，或加入防止RNA降解的样品稳定剂，。
RNA	如要提供RNA，最低总RNA量为3~5μg（浓度＞0.3μg/μl），最低mRNA量为0.3~0.5μg（浓度>30ng/μl）。OD260/OD280值为1.9~2.0，以我方电泳胶图、紫外分析仪定量为准。RNA 的总量根据库容量不同会有所增加。注意： a) 建议由我方提取RNA； b) 对于客户提供的RNA，由于样品原因RACE可能没有结果或结果不好，其损失和责任全部由样品提供方承担； c)由样品质量产生的任何问题，其损失和责任应全部由样品提供方承担。

服务流程

提取总RNA，纯化mRNA，分别反转录合成5’和3’RACE-ready cDNA第一链；或（材料有限的情况下）提取总RNA，分别反转录合成5’和3’RACE-ready cDNA第一链。然后以其为模板，通过LD-PCR分别进行5’和3’RACE。最后，从两个有相互重叠序列的5’和3’-RACE产物中获得全长cDNA；或者通过分析RACE产物的5’和3’端序列，合成相应引物扩增出全长cDNA。

完成时间

6~8周内完成。对于有些RNA难以抽提的材料或样品材料本身质量问题，时间较长，会在1周内和客户协商约定时间。

最终产品

1.ib扩增全长片段测序报告一份；

2、扩增的全长片段的电泳图；

3、含全长片段的质粒及细菌各一份。