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| 提供商： | 上海晶诺生物科技有限公司 |
| 服务名称： | 结核分枝杆菌基因敲除技术服务 |
| 规格： | 1株/服务 |
技术原理与实验步骤
采用噬菌体介导的同源重组进行基因敲除：首先构建同源交换位点（AES），随后将其整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组中，获得噬菌粒（phasmid）；将噬菌粒导入耻垢分枝杆菌，获得整合有同源交换位点的重组噬菌体，经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体，对结核分枝杆菌进行转染；将转染后的结核分枝杆菌涂布到含潮霉素抗性的固体培养基上，37℃培养4-5周，挑取单克隆，通过PCR等方式进行验证。
技术优势：
成功率高：潮霉素抗性平板中挑取的克隆子中，超过95%的克隆子为阳性克隆子
参考文献
1. Specialized transduction: an efficient method for generating marked and unmarked targeted gene disruptions inMycobacterium tuberculosis, M. bovis BCG and M. smegmatis. Stoyan Bardarov et al., Microbiology, 2002, 148: p3007-3017.
2. Specialized transduction designed for precise high-throughput unmarked deletions in Mycobacterium tuberculosis. Jain P, Hsu T et al., mBio, 2014, 5(3): e01245-14.
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