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份 库存999份
| 货号： | oneshineF0003 |
| 规格： | 7万元/株 |
一、原理
此系统包括lentiSAMv2质粒和lenti MS2-P65-HSF1_Hygro质粒。lentiSAMv2质粒如图一所示，其中，eSpcas9(1.1)也叫做dCas9，是将Cas9酶切位点突变后形成的，它只具有结合基因组和sgRNA的能力，而不具备切割DNA的能力。lentiSAMv2质粒是经过改造的gRNA质粒，在sgRNA后面加入了19个碱基（MS2 binding site）。这19个碱基经过转录后形成一个具有茎环结构的RNA，此RNA能特异性地与MS2蛋白结合。而在另一个载体上，MS2蛋白已经与P65、HSF1蛋白融合。其中，P65、HSF1是两个转录因子。因此，当两个载体同时进入同一个细胞后，lentiSAMv2质粒表达“sgRNA- MS2 binding site“融合RNA及dCas9蛋白，lenti MS2-P65-HSF1_Hygro载体表达MS2-P65-HSF1。在dCas9作用下，则形成“基因组DNA-dCas9-sgRNA-MS2 binding site-MS2- P65-HSF1”这一超级复合体。当sgRNA为转录起始位点时，此超级复合体定位于转录起始位点，由于P65、HSF1可以募集更多转录因子，因此可启动转录，从而激活转录起始位点后面的基因表达。
我们合成了9万多个long noncoding RNA转录起始位点的sgRNA（对应1万多个lncRNA），分别载入lentiSAMv2质粒中，再把此9万多个质粒混合起来，形成文库。并且我们将此文库整合到了细胞中，一个125cm2细胞培养瓶中含有约108个细胞，每个细胞被激活一个lncRNA，共约1万个lncRNA被激活，所以含有每个特定基因缺陷的细胞约有10000个（108/1万）。
二、参数
靶基因物种：人
lncRNA数目：10,504
gRNA数目：96,458
细胞类型：胃癌、乳腺癌、结肠癌等癌细胞系和永生化的细胞系。
价格：7万元/株
三、应用
【应用举例：细胞凋亡相关long noncoding RNA筛选】
取细胞文库进行扩增，然后平均分成两份，每一份包含108个细胞，每个细胞被激活了一个long noncoding RNA，共约1万个lncRNA被激活，所以含有每个特定激活lncRNA的细胞约有10000个（108/1万）。向其中一份细胞中加入放线菌素D、诱导细胞凋亡（A组），在另一份细胞中加入溶剂、作为对照（B组）。A组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞A1、未凋亡细胞A2。B组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞B1、未凋亡细胞B2。分别对A1、A2、B1、B2进行短测序，检测哪些lncRNA被激活了。A2中被激活的lncRNA即为能抵抗凋亡的lncRNA，B1中被激活的即为能诱导凋亡的lncRNA。其它应用：
（1）新药靶点确定与验证
（2）环状RNA上游调控机制分析、下游调控机理分析
（3）Long noncoding RNA作用机制验证
（4）脂肪代谢机制研究
（5）干细胞自我更新、不对称性分裂机制等。
温馨提示：不可用于临床治疗。
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