微量琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒_RNA和蛋白分离_核酸纯化_生化试剂库_商城

货号：	DY6256
供应商：	德元国际
数量：	10
规格：	50T

微量琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒

MicroGel Extraction Kit

离心柱式

Cat No:DY6256

Kit Size:50T

产品组分

组分 Contents

50preps

Buffer 1#

50ml

Buffer 2#

15ml

Buffer (concentrate) 3#

10ml

Buffer 4#

10ml

吸附柱

收集管

储运条件

本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输。

说明

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。

产品简介

本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量 DNA 片段，溶胶速度快，并利用硅基质膜技术，以非常小的终洗脱体积（可少至 10 μl），从琼脂糖凝胶中，快速纯化 50bp-50kb 的 DNA 片段，纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，从而可获得高纯度、高浓度，完整性好的 DNA，回收率高达 90%。本试剂盒回收纯化的 DNA 可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。

实验前准备及注意事项

1.本实验需要无水乙醇、异丙醇、离心管请自备。

2.电泳时最好使用新的电泳缓冲液，避免影响电泳和回收效果。

3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

4..使用前请检查Buffer 1#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。

4．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer 3#中加入无水乙醇。

5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。

6.所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤
	1. 将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管（自备）中，称取重量。
	注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。
	2. 向胶块中加入3倍体积Buffer 1#；当琼脂糖凝胶浓度>2%时，建议使用6倍体积Buffer 1#（如凝胶重为100 mg，其体积可视为100 μl，依此类推）。
	3. 50℃孵育10min，其间每隔2-3min温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解。
	注意：1）胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合 DNA 的能力较弱。
	2)在胶充分溶解后检测 pH 值，若 pH 值大于 7.5，可向含有 DNA 的胶溶液中加 10-30 μl 的 3 M 醋酸钠（pH 5.0）将pH 值调到 5-7。
	4．加入1倍胶体积异丙醇，上下颠倒混匀（如凝胶为100mg,则加入100μl异丙醇）。
	5. 柱平衡：向吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中加入200 μl Buffer 2#，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	6. 将步骤4所得溶液加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	注意：吸附柱容积为700 μl，若样品体积大于700 μl 可分批加入。
	7．吸附柱中加入500 μl Buffer 1#，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	8. 向吸附柱中加入650 μl Buffer 3#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入Buffer 3#静置2-5min再离心。
	9. 12,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。

10. 将吸附柱放到一个新的离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加10 μl Buffer 4#（pH 8.5），室温放置2min。12,000 rpm离心1min，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。
2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重复步骤10。
3）洗脱体积不应小于10 μl，体积过少会影响回收效率。
4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。
5）回收大于10 kb的DNA片段时，Buffer 4#应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

5）回收大于10kb的DNA片段时，Buffer 4#应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

温馨提示：不可用于临床治疗。

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微量琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒

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