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| 货号： | TL-001-1 |
| 规格： | 100uL |
保存温度：-20℃
产品包装：2XT4 快速连接酶 100μl（20次）
产品特点：该酶包含T4 DNA连接酶酶、Buffer、ATP增强剂等，优势组合，独特配方提供给您更简捷快速的实验。而使用2XT4快速连接酶，16℃过夜连接可获得最高的连接效率； 在室温(25℃)下，仅需5-15分钟即可完成粘性末 端或平滑末端DNA片段的连接反应。
质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的 条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
活性定义：在20 ml的连接反应体系中, 6 mg的λDNA-Hind III的分解 物在16℃下反应30分钟时, 有90%以上的DNA片段被连接 所需要的酶量定义为1个单位。
产品用途：DNA片段和载体DNA的连接。DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
快速连接步骤：取50 ng载体和3倍摩尔量的插入片段，加入2XT4快速连接酶 5ul，混匀。用双蒸水调整总体积为10 ul，充分轻柔混匀（切勿剧 烈震荡，可能导致酶部分失活），置于室温 (25℃) 作用5-15分钟。冰上放置，转化（如不立即进行转化实验请冻存 于-20℃）
使用建议：粘末端的连接反应: 插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要，此比例在2-6之间最好，低于2:1就会导致较低的连接效率，高于6:1则会导致多个插入。摩尔比请按载体与插入片段 DNA浓度及分子大小来计算。平滑末端的连接反应： 平滑末端的连接反应与突出末端 相比反应较慢(其Km值约为突出末端的100倍)。进行平滑末 端的连接反应时，可提高DNA浓度，将使用酶量增加到突出 末端量的2-5倍左右。 向粘粒或噬菌体进行连接反应：可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1，同时增大DNA浓度以便取得良好效果。 反应温度：该酶的最适温度为37℃，由于热稳定性较差，因此长时间反应时通常需在16℃下进行，若反应1-2小时 左右的话也可在室温下进行反应。
抑制剂：T4 DNA连接酶要求Mg2+，因此螯合Mg 2+的EDTA 的存在会阻碍反应。将溶解于含有高浓度EDTA缓冲液中的 DNA准备作为样品使用时，最好先用灭菌蒸馏水或TE缓冲液进行置换。
温馨提示：不可用于临床治疗。
