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份 库存999份
| 提供商： | 上海海科 |
| 服务名称： | qPCR,SNP分析等 |
TIPS
² Beacon 技术：该技术以美国人 Tagyi 为代表。也是加入了荧光探针，但它是环状的寡核苷酸探针，分别由茎部和环部组成， 两端分别标记 荧光报告基团和荧光猝灭基团；在无靶序列的情况下，探针始终是环状，报告基团的荧光被猝灭基团猝灭，使荧光检测仪检测不到荧光信号；而在有靶序列时，即在 PCR 的退火阶段探针与靶序列结合，使荧光报告基团和猝灭基团分开，这样荧光仪就可以检测到荧光，且荧光信号的强弱代表了靶序列的多少。
² FRET 技术：该技术以 Roche 公司为代表。它的基本原理是：两条直线型寡核苷酸探针，其中一条的 3 ‘ 端标记荧光激发基团，另一条的 5 ' 端标记荧光检测基团，在无靶序列的情况下，两条探针分开，无法进行能量的传递，这样荧光仪就不能检测到荧光信号；而当有靶序列时，即在 PCR 的退火阶段两条探针与靶序列结合，使得两条探针上的荧光基团可以进行能量的传递，这样荧光仪就可以检测到荧光信号，且荧光信号的强弱代表了靶序列的多少。
² 实时 PCR 中的几个常见语
Ø Ct 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。
Ø 荧光域值（threshold）：是指 PCR 反应的前 15 个循环的荧光信号，即： threshold
Ø Ct 值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的 Ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多， Ct 值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代 Ct 值。因此，只要获得未知样品的 Ct 值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
本公司可采用SYBR Green嵌合荧光法或者TaqMan探针法以及业界权威的金标准MGB探针法，进行样本基因的相对或者绝对定量，主要应用于三个方面的研究：相对定量（mRNA表达量分析、siRNA效果验证）、绝对定量、SNP分型，我们使用业界权威的仪器ABI 7500fast,保证结果的准确性。
相对定量：基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
绝对定量：绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量 (起始拷贝数)分析。
SNP分型：对于一次性小于10个SNP位点分型时，直接采用ABI经过验证的TaqMan探针SNP分型试剂盒，节省了条件摸索的时间。
服务要求：
◇ 进行mRNA表达量分析时，请寄送足量的并且保证纯度的Total RNA (浓度在500 ng/μl以上，体积在 20 μl以上)。如果目的基因表达量低时，应尽量提供更高浓度的Total RNA。
◇ 如果提供的材料为细胞或组织，DNA、RNA的提取费用另收。 同时应保证材料新鲜，动物细胞数为10^6以上，动物组织为100 mg以上。
实验步骤介绍：
以相对定量为例：
（1）引物设计及合成。
（2）制作管家基因如GAPDH及目的基因标准曲线，使用设计合成的引物，以客户提供的Total RNA样品为模板，进行Real Time PCR反应，确认引物模板的反应性能。然后将模板进行5个浓度梯度稀释，制作标准曲线，以供进一步定量分析使用。
（3）Real Time PCR反应及定量分析，对客户提供的RNA Sample，进行Real Time RT-PCR反应，并进行定量分析。用相对定量方法进行定量分析时，要对管家基因等参比基因进行同样操作，用所得到的值进行RNA量的校正，最后求得目的基因的相对表达量。
GAPDH melt
GAPDH Sample
GAPDH Standard
GAPDH Sample
GAPDH Standard
服务项目：
| 服务项目名称 | 材料 | 技术方法 | 周期 |
| 相对定量 | RNA、细胞、组织 | SYBR Green嵌合荧光法 | 4周 |
| 绝对定量 | DNA、RNA、细胞、组织 | TaqMan探针 | 4周 |
| SNP分型 | DNA、全血 | ABI TaqMan SNP分型探针 | 8周（其中购买探针需要4-6周 |
收费标准：
18元/反应，如果提供组织样本，RNA提取费用另计。
