点击图片查看原图
份 库存999份
| 货号： | ZDK-006Z |
| 保存条件： | -20℃ |
| 数量： | 大量 |
| 保质期： | 6个月 |
| 规格： | 20T |
产品编号：ZDK-006Z 规格：20T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、试剂组成
A. 裂解液(lys) 2×1.0 ml
B. TRAP混合物(TRAP-mix) 1×0.6ml
C. 酶(E) 1×8μl
D. 引物R(R-primer) 1×8μl
E. 阳性对照(control) 1×10μl
二、方法
1．取细胞105 _ 106(组织50mg,匀浆或液氮冷冻捣碎)，立即加裂解液100μl混匀，冰浴30min,4℃，16000g离心30min，取上清。
2．在反应管中依次加入以下组份:TRAP-mix 25μl；E 0.4μl；提取液 1μl(提取液蛋白浓度0.5~0.8μg/μl)；混匀，30℃保温30min。
3． 在反应管中加入R-primer 0.4μl,混匀，加20μl石蜡油，按以下条件进行PCR扩增：变性94℃/30s；退火55℃/30s；延伸72℃/30s；循环30 次。
三、结果分析
在反应管中加5μl 6×DNA上样缓冲液，混匀，取30μl上样于12%非变性聚丙烯酰胺凝胶，1×TBE条件下电泳，银染，出现间隔6bp梯形条带者为阳性。
四、银染方法
1．将凝胶用5倍凝胶体积的固定液(10%乙醇和0.5%乙酸)浸没，充分振荡3分钟。
2．向固定液中加入硝酸银溶液至终浓度为0.2%，振荡染色5-10分钟。
3．将凝胶用超纯水振荡洗涤2~3次，每次30秒，倾干水份。
4．将凝胶转移到5倍凝胶体积的显色液(含3.0%氢氧化钠和0.1%甲醛)中，振荡，直至所有条带出现，一般约需3~10分钟左右。
5．将显色凝胶转至新的固定液中再固定5分钟，制备干胶或照相保存。
五、注意事项
1．操作过程中避免RNase污染，阳性对照避免反复冻融。
2．最好设置一管阴性对照。
3．用于银染的水必须是超纯的或是经过玻璃装置重蒸的双蒸水。
4．避免交叉污染。
5．-20℃，至少稳定6个月。
北京正旦国际科技有限责任公司
地址：北京市昌平区生命园路33号
邮编：102206
电话：010-80705573 传真：010-80705803
公司网站：www.c-nintl.com 电子邮箱：zdmarket@163.com
温馨提示：不可用于临床治疗。
通过北京市工商行政管理局昌平分局认证 
