货号：	HZ10043
供应商：	上海沪震生物科技有限公司
数量：	大量
保质期：	1年
保存条件：	4度保存和运输

有效shRNA筛靶套餐

服务简介：

软件设计或者现有shRNA 库通常可以提供3-5条shRNA ，但是在RNA干扰主体实验中，一般用1-2条shRNA进行实验即可。因此，在进行RNA干扰主体实验之前，有必要进行有效shRNA的筛选，在3-5条shRNA中筛选1-2条干扰效率最高的shRNA ，以进行后续实验。

如果目的细胞的质粒转染效率较高( 大于70%) ，则有效shRNA的筛选可以直接在日的细胞中进行，即所谓的"内源筛靶" 。而如果目的细胞的质粒转染效率一般(小于70%) ，则有效shRNA 的筛选可以在293 、CHO等工具细胞中进行，即所谓的"外源筛靶"。

无论是内源筛靶，还是外源筛靶，其基本步骤都包括:

shRNA表达载体构建；
目的基因过表达载体构建( 内源筛靶可省293等工具细胞中如有目的基因的高表达，亦可省去此步骤)；
细胞培养及转染；
RNA干扰效率检测(RT-PCR 、Westem-blot等)。

本公司根据以上服务内容，推出有效shRNA筛靶套餐，包括有效shRNA内源筛靶套餐(S2003) 、有效shRNA外源筛靶套餐(S2004) ，您可以根据需要订购相应的筛靶套餐。

TIPS :什么情况下选择外源筛靶？

目的细胞不易得到，例如原代细胞、稀有细胞株，或者目的细胞暂时还未到位；
目的细胞转染效率低(转染效率低于70%)；
目的细胞需要诱导才能表达靶基因；
目前尚无靶基因的抗体。

如果存在上述情况，您可以选择外源筛靶。选择外源筛靶时，有效shRNA的筛选通常在293 、CHO等工具细胞中进行。这些细胞培养容易、质粒转染效率高，是很好的研究平台。

如果293等工具细胞中有目的基因高表达，则可直接导入shRNA表达载体进行筛选。而如果293等细胞中目的基因表达量低，则需要额外共转染一个目的基因的过表达载体，人为地创造一个目的基因高表达环境，以便于shRNA的筛选和验证。在表达目的基因时，还可以带入EGFP 、RFP等荧光标记，或者Flag 、Myc 、His等标签，以便于后续RNA干扰效果的检测。

温馨提示：不可用于临床治疗。